INFLUÊNCIA DO BACILLUS CALMETTE-GUÉRIN NA MATURAÇÃO DE CÉLULAS DENDRÍTICAS HUMANAS DIFERENCIADAS A PARTIR DE MONÓCITOS

Abstract

Objetivos: As células dendríticas (DCs) desempenham um papel essencial no sistema imune e têm sido utilizadas na imunoterapia contra o câncer. Este estudo visa comparar a maturação de DCs in vitro por BCG tendo como referência a maturação por TNF-α, avaliando a produção de citocinas e a influência na produção de citocinas pelos linfócitos T(Ly-T). Materiais e métodos: DCs foram obtidas de monócitos isolados do sangue de doadores saudáveis e cultivados por 5 dias em RPMI-1640, soro fetal bovino (10%), IL-4 e GM-CSF para diferenciá-las em DCs imaturas. A maturação terminal foi realizada por 24h com TNF-α e IFN-α (DC-TNF) ou BCG morto (DC-BCG) na proporção de 1:1. A dosagem de citocinas de DCs foi complementar neste estudo. As DCs foram co-cultivadas com Ly-T autólogos(AT) e alogêneicos(ALO) para avaliar a produção de citocinas (1:10 DC:Ly-T por 24 e 48 h). A dosagem de citocinas foi realizada com o kit Bio-Plex ProTM Human Chemokine Assays (27 citocinas). Resultados: A DC-TNF gerou níveis mais altos de IP-10 > IL-8 > RANTES, sugerindo um perfil mais pró-inflamatório. A produção de IL-12p70, IL-10 IL-15, IL-1β, MIP-1α, MIP-1β e MCP-1 foram similares entre DC-TNF e DC-BCG. Em relação à produção das citocinas de Ly-T (AT e ALO), as de perfil Th1: IFN-γ > IL-2 > e TNF-α foram mais elevadas com DC-BCG, tanto no cultivo AT, quanto no cultivo ALO do que por DC-TNF. A citocina IL-12p70 só foi produzida pelos Ly-T AT e ALO estimulados por DC-BCG. As citocinas Th2: IL-4 e Eotaxin foram pouco expressas pelos Ly-T AT no estímulo com DC-TNF, já no estímulo com DC-BCG resultou em maior concentração destas citocinas. A produção de IL-13 teve diferença estatisticamente significativa, atingindo níveis três vezes maiores pelos Ly-T AT estimulados por DC-BCG .No estímulo ALO observamos um aumento significativo na produção de IL-4 e IL-13 por esses Ly-T estimulados por DC-BCG. No perfil Th17, a IL-17a, foi produzida em maior quantidade pelos Ly-T estimulados por DC-BCG, do que por DC-TNF, tanto na cultura AT quanto ALO. Em relação às demais citocinas produzidas por Ly-T AT, IL-7 e G-CSF só foram produzidas pelos Ly-T estimulados por DC-BCG. Não observamos um aumento estatisticamente significativo entre a produção de RANTES e IL-1ra por esses Ly-T nos dois estímulos. Os Ly-T AT estimulados por DC-BCG produziram níveis mais altos e estatisticamente significativos de MIP-1α > IP-10 > IL-1β IL-8 > GM-CS = IL-6 > IL-9 = MCP-1 do que os Ly-T estimulados por DC-TNF. Não foi encontrada diferença estatística entre a produção das citocinas: IP-10, MCP-1, MIP-1β e RANTES por Ly-T ALO estimulados por DC-BCG ou DC-TNF. Os Ly-T ALO estimulados por DC-BCG tiveram maior produção de MIP-α = IL-8 > IL-6 = IL-9 = GM-CSF = IL-1β = IL-1RA do que os estimulados por DC-TNF. Discussão: Apesar das limitações na estratégia de dosagem de citocinas, e da pequena amostragem (n = 5), nosso estudo demonstrou o comportamento biológico dos Ly-T estimulados por DCs num modelo autólogo e alogênico. O uso de BCG como ativador do sistema imune tem sido associado à redução de infeções e a um efeito antitumoral. Os resultados indicam que o uso de DCs ativadas por BCG pode amplificar a resposta dos Ly-T em comparação com o estímulo por TNF-α. Conclusão: As DCs maduras com BCG morto demonstram uma capacidade superior às DC-TNF em elevar a produção de citocinas pelos Ly-T associados aos perfis Th1, Th2 e Th17.