Введение в молекулярную диагностику насекомых

Abstract

Насекомые, благодаря своей многочленности и широкой распространенности, играют важную роль роль в биоценозах. Многие насекомые являются вредителями сельскохозяйственных культур. Эффективная борьба с насекомыми-вредителями возможна только при их правильной идентификации, что обычно решается морфологическими методами анализа. Молекулярно-генетические методы позволили расширить возможности исследователей в изучении многих вопросов биологии насекомых, и, в частности, их диагностики на любых стадиях жизненного цикла, с чем обычно не справляется традиционный подход. Данный обзор охватывает широкий спектр вопросов, связанных с молекулярно-генетическим анализом насекомых. В первом разделе обсуждаются способы фиксации и хранения материала, и их влияние на сохранность ДНК насекомых. Далее приводится общая информация по дизайну популяционных исследований, а именно определению объема выборки, необходимой для исследования. Большое внимание уделено рассмотрению различных схем выделения ДНК из насекомых, приводятся примеры как экспресс-методик, так и более тщательных протоколов для получения ДНК высокой степени очистки. Рассматриваются методы выделения ДНК, позволяющие сохранить целостность насекомых для дальнейших морфологических исследований. Подробно описываются методы проверки качества полученного генетического материала, что особенно важно для дальнейшего анализа путем полимеразной цепной реакции (ПЦР). В последнем разделе приводятся различные методы ПЦР-анализа ДНК и примеры их практического применения для решения различных фундаментальных и прикладных задач в исследованиях насекомых, например, в таксономическом определении образцов, определении пола особей, поиске различных патогенов и симбионтов, выяснении пищевых предпочтений и др.

Keywords

• ПЦР
• насекомые
• образец
• ДНК
• праймеры
• секвенирование