MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTICS OF CANINE COOLED AND FROZEN SEMEN USING TWO DIFFERENT EXTENDERS CARACTERÍSTICAS MORFOFUNCIONAIS DO SÊMEN CANINO REFRIGERADO E CONGELADO, USANDO DOIS DIFERENTES MEIOS DILUENTES

Abstract

The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders: TRIS/Fructose/Citric Acid/Glycerol (8 %) - (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modified) and commercial extender - MP50) (PAPA et al., 2002) – for freezing dog semen. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. The samples semen were evaluated for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultra structural analysis in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3). The samples were packaged in 0.5 mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/ straw, and kept at 5 0C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 70 0C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity (p<0.05) and for thawed semen (T3), there was no significant difference between extenders. By ultra structural analysis, it was possible to verify swelling plasma and acrosomal sperm membranes in the different stages of freezing process. In conclusion, the extenders showed the same results as to morphofunctional characteristics the semen canine thawed. KEY WORDS: Semen, dog, freezing and extender. O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de análise funcional e morfológica, dois meios diluentes – TRIS/ frutose/ácido cítrico/glicerol (8 %) (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modificado) e um meio comercial (MP50) (PAPA et al., 2002) – para criopreservação de sêmen canino. Colheramse dez ejaculados de cães adultos, por manipulação digital do pênis. Avaliaram-se as amostras pela motilidade espermática, velocidade espermática, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática, e análise ultra-estrutural no sêmen fresco (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). Envasaram-se as amostras diluídas em palhetas francesas de 0,5 mL, com 40 x 106 espermatozóides/palheta e se as mantiveram por sessenta minutos a 5 ºC (T2); em seguida, transferiram-nas para vapor de nitrogênio líquido durante vinte minutos e posteriormente estocadas. O sêmen foi descongelado a 70 ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do animal nas diferentes variáveis, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. Na refrigeração (T2), o meio MP50 apresentou melhores resultados no teste hiposmótico e na integridade de membrana (p<0,05) e no sêmen descongelado (T3) não foi observada diferença significativa entre os meios (p>0,05). A análise ultra-estrutural do sêmen mostrou edema e ondulação da membrana plasmática e acrossomal nas diferentes etapas do processo de criopreservação. Conclui-se que os meios diluentes utilizados mostraram ser semelhantes quanto às características morfofuncionais após a descongelação. PALAVRAS-CHAVE: Cão, congelação, meio diluente, sêmen.