NMR联用HILIC-UPLC-MS/MS测定TNBS诱导的结肠炎大鼠尿液和血浆代谢物变化

Abstract

目的基于非靶标和靶标代谢组学技术，探讨三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的结肠炎模型大鼠尿液以及血浆中内源性代谢物的变化。方法16只雄性SD大鼠随机分成对照组和模型组，每组8只，对模型组大鼠给予TNBS灌肠以建立实验性大鼠结肠炎模型。利用核磁共振氢谱（1H NMR）检测两组大鼠尿液代谢物，同时联用HILIC模式超高效液相色谱串联三重四级杆质谱（HILIC-UPLC-MS/MS）测定以上大鼠尿液以及血浆中氨基酸水平，并通过多元变量统计方法对代谢组学数据进行分析。结果同对照组相比，1H NMR结果表明模型组大鼠尿液代谢轮廓发生明显改变，其中丙酮酸、甲酸、甲胺与柠檬酸水平升高，氧化三甲胺和丙二酸水平降低（均P < 0.05）；HILIC-UPLC-MS/MS结果显示模型组大鼠尿液中苯丙氨酸、组氨酸水平显著上升，血浆中赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、甘氨酸、色氨酸、脯氨酸、组氨酸和酪氨酸水平显著升高，但谷氨酰胺、缬氨酸、丙氨酸和异亮氨酸水平明显降低（均P < 0.05）。结论经TNBS诱导的结肠炎模型大鼠，其能量代谢、胺类代谢以及氨基酸代谢通路受到影响；采用的1H NMR与HILIC-UPLC-MS/MS联用的多元代谢组学方法，揭示了结肠炎大鼠尿液及血浆代谢物的变化，为炎症性肠病的机制研究与相关生物标志物的探索提供了新的思路。

Keywords

• 结肠炎;代谢组学;核磁共振;HILIC模式超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法