Caracterización de osteoesferoides para inducir mineralización

Abstract

Este trabajo muestra la obtención de osteoesferoides con la capacidad de formar nódulos mineralizados, puediendo utilizarse como modelos de estudio para probar nanofármacos o nanomateriales. Se realizaron cultivos celulares en suspensión para obtener esferoides de osteoblastos fetales, probando diferentes concentraciones celulares/mL durante 5 días. Se seleccionó la condición donde el diámetro va de 80 a 150 μM para realizar ensayos a 3, 7, 14 y 21 días. La viabilidad celular de los osteoesferoides se cuantificó mediante exclusión con azul tripano y se realizaron ensayos clonogénicos para determinar el efecto del medio mineralizante en la formación de estas estructuras. La integridad de los osteoesferoides se observó por H&E y la formación de nódulos mineralizados fue detectada mediante tinción con alizarina roja. Los resultados muestran osteoesferoides regulares sin coagregados a una concentración de 5 x 102 células /mL y viables por arriba del 70% a los 7 días de formación. Los ensayos clonogénicos no muestran diferencias significativas en morfología ni el número de colonias entre el control y el medio para inducir mineralización. Las tinciones con H&E dejan ver núcleos y citoplasma definido a los 3, 7 y 14 días, y a los 7 y 14 días la tinción con alizarina roja sugiere que están formando deposiciones de calcio.

Keywords

• osteoesferoides
• cultivo tridimensional
• nódulos mineralizados
• células madre