Procesamiento proteolítico de la toxina Cyt1Ab1 producida por Bacillus thuringiensis subespecie Medellín

Abstract

<p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">Bacillus thuringiensis produce </span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Symbol">d</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">1 </span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">endotoxinas que requieren activación proteolítica para ser activas. La activación de la toxina citolítica de 28 kDa (Cyt1Ab1) de B. thuringiensis subesp. Medellín con tripsina, quimotripsina y extractos intestinales de larvas del mosquito Culex quinquefasciatus fue analizada. La toxina Cyt1Ab1 de B. thuringiensis subsp. medellin fue procesada por todas las proteasa evaluadas a fragmentes entre 23 y 25 kDa, mientras que el procesamiento de la toxina Cyt1Aa1 produjo fragmentos entre 22.5 y 24.5 kDa. La toxina Cyt1Ab1 fue procesada preferencialmente in vitro en un pH de 12, produciendo un fragmento de 25 kDa cuando se trató con extractos intestinales de larvas de mosquito, y resultados similares se obtuvieron cuando la toxina fue activada in vivo por larvas de C. quinquefasciatus. La toxina solubilizada y los fragmentos resistentes a la acción de las proteasas generados en los experimentos in vitro, demostraron actividad hemolítica, pero no mosquitocida. La secuencia amino terminal del fragmento tratado con extractos intestinales de C. quinquefasciatus indica que el sitio de corte está localizado entre Lys</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">31 </span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">y Asp</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">32</span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">, generando una proteína con secuencia amino Terminal de DDPNEKNNHNS; mientras que la toxina tratada con tripsina mostró un sitio de corte entre Leu</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">29 </span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">y Arg</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">30</span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">, y la tratada con quimotripsina entre Arg</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">30 </span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">and Lys</span><span style="font-size: 5pt; font-family: Arial">31</span><span style="font-size: 8.5pt; font-family: Arial">.</span></p>