Тактика выявления частых и редких типов химерного транскрипта BCR-ABL при хроническом миелоидном лейкозе

Abstract

Актуальность и цели. Диагноз хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) считается установленным при обнаружении транслокации t(9;22)(q34;q11) цитогенетическим методом и/или выявлении химерного транскрипта BCR-ABL методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Известно, что у пациентов с ХМЛ наиболее часто проводят определение двух наиболее распространенных вариантов химерного транскрипта BCR—ABL: e13a2 (b2a2) и e14a2 (b3a2). Однако описаны и редкие варианты химерного транскрипта BCR—ABL, которые могут остаться незамеченными. Более того, своевременная диагностика и выявление различных вариантов химерного транскрипта представляются важной задачей, т. к. от строения химерного гена BCR-ABL может зависеть клиническое течение заболевания и эффективность проводимой терапии ингибиторами тирозинкиназ. Принимая во внимание, что в ряде случаев диагноз ХМЛ может быть установлен без стандартного цитогенетического исследования, только по данным ОТ-ПЦР, мы посчитали важным создать диагностический алгоритм, который позволял бы выявлять практически любой тип химерного транскрипта BCR—ABL. Методы. С января 2004 г. по декабрь 2013 г. в лаборатории молекулярной биологии отдела детской онкологии и гематологии ОДКБ № 1 (г. Екатеринбург) диагноз ХМЛ был подтвержден у 1082 пациентов. Среди них было мужчин — 531 (49 %), женщин — 551 (51 %). Медиана возраста составила 50 лет (диапазон 5–88 лет). Всем пациентам проведены стандартное цитогенетическое и молекулярно-генетическое исследования. Праймеры, комплементарные нуклеотидной последовательности гена ABL, локализуются в экзонах 2 и 3 ABL и используются для выявления всех типов транскриптов. Праймеры, комплементарные нуклеотидной последовательности гена BCR, локализуются либо в экзонах 12 и 13 для выявления наиболее типичных типов транскриптов e13a2, e14a2 (M-bcr), либо в экзоне 1 для обнаружения транскрипта e1a2 (m-bcr). При обнаружении ампликонов, отличных по размеру от e13a2, e14a2 и e1a2, проводилось их прямое секвенирование в двух направлениях c применением праймеров, использовавшихся во втором раунде гнездной ОТ-ПЦР, и набора Big Dye Terminator 3.1. Результаты. Проанализировав данные 1082 пациентов с верифицированным диагнозом ХМЛ, мы разработали диагностический алгоритм выявления частых и редких типов химерного транскрипта BCR—ABL при ХМЛ с использованием метода ОТ-ПЦР. Используя данный алгоритм, мы выявили частые варианты BCR—ABL — e13a2 и e14a2 в 35,89 и 62,53 % случаев соответственно. На долю редких транскриптов — e13a3, e14a3, e19a2, e1a2, e3a2, e6a2, e8a2 — суммарно пришлось 1,57 % случаев. Заключение. Таким образом, предложенный диагностический алгоритм оказался эффективным для выявления частых и редких типов химерного транскрипта BCR—ABL у пациентов с ХМЛ.

Keywords

• хронический миелоидный лейкоз
• молекулярная диагностика
• химерный транскрипт BCR-ABL