Archives of Razi Institute (Dec 2015)
ساخت کتابخانه قطعه فب آنتی بادی پلی کلونال نوترکیب انسانی با استفاده از لنفوسیت های خون محیطی مصدومین مارگزیده
Abstract
مسمومیت ناشی از مارگزیدگی در انسان در بسیاری از کشورهای گرمسیری و نیمه گرمسیری یک تهدید جدی محسوب می گردد. بهترین درمان قابل قبول برای اشخاص مارگزیده استفاده از پادزهرها می باشد. با این حال این پادزهرها بدلیل یکسری مشکلات اقتصادی و پزشکی نیاز به بهبود بیشتری دارند. در این تحقیق، یک کتابخانه ژنی ترکیبی انسانی برعلیه تعدادی از مارهای زهری ایرانی ساخته شده است. RNA تام از لنفوسیتهای خون محیطی دو نفر از مصدومین مارگزیده بهبود یافته تهیه شد. از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز ترنس کریپتاز معکوس برای ساخت cDNA و ازدیاد زنجیره های سنگین(Fd) و سبک کاپای ایمونوگلوبولین جی استفاده شد. بعد از هضم زنجیره Fd با آنزیمهای SpeI و XhoI و همچنین زنجیره کاپا با آنزیمهای XbaI و SacI، این زنجیره ها به طور پشت سرهم به داخل حامل pComb3x کلون شدند و سپس برای ساخت کتابخانه فب، این حاملهای نوترکیب به داخل باکتری تی جی یک رانده شدند. برای تعیین تعداد وکتورهای حاوی قطعه فب، پلاسمیدهای دوازده پرگنه کتابخانه استخراج و بعد با آنزیم SfiI هضم گردیدند. طول زنجیره های Fd و کاپای تکثیر شده 650 تا 750 جفت باز بود. تعداد اعضای اولیه کتابخانه 105×9/4 تعیین گردید که نیمی از آنها حاوی قطعه ای به اندازه قطعه فب بودند. این نتیجه، با نتیجه تحقیق بعضی از محققین دیگر مشابهت داشته و نشان می دهد که این روش می تواند اسباب مناسبی برای تولید قطعه فب آنتی بادی پری کلونال انسانی برای استفاده در درمان مصدومین مارگزیده باشد.
Keywords
