Tạo dòng và biểu hiện protein dung hợp LTB-STB của Enterotoxigenic Escherichia coli gây tiêu chảy trên heo con

Abstract

Bệnh tiêu chảy do Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) làm heo giảm trọng lượng, chậm lớn hoặc chết, gây nhiều thiệt hại kinh tế nhưng vẫn chưa có vaccine phòng ngừa. Vaccine giải độc tố phổ biến nhất dựa trên tiểu phần B của độc tố bền nhiệt (STb) nhưng lại sinh miễn dịch kém. Để giải quyết vấn đề, STb được dung hợp với tiểu phần B độc tố nhạy nhiệt (LTb) để tăng tính sinh miễn dịch cho STb và mở rộng phổ kháng. Trong nghiên cứu này, gene estB mã hóa STb và plasmid pET28a-eltB được xử lý với hai enzyme HindIII và XhoI, sau đó nối với nhau bằng T4 ligase để tạo plasmid pET28a-eltB-estB. Plasmid tái tổ hợp sau khi xác nhận bằng giải trình tự được biến nạp vào chủng E. coli BL21 (DE3) và được kiểm tra sự biểu hiện protein bằng phương pháp SDS ‑ PAGE và Western blot với kháng thể anti-6xHis. Kết quả, gene mã hóa độc tố đường ruột LTB-STb đã được tạo dòng và biểu hiện thành công ở dạng thể vùi, làm nguyên liệu cho các thử nghiệm tính sinh miễn dịch của protein dung hợp này.

Keywords

• Độc tố ST
• ETEC
• heo con
• tiêu chảy
• vaccine tái tổ hợp