EVALUATION OF A RAPID SCREENING ASSAY FOR BACTERIAL IDENTIFICATION (DOT-ELISA) IN FECAL SAMPLES FROM CHILDREN

Abstract

With the objective of standardizing a Dot Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (Dot-ELISA) to detect antigens of fecal bacterial enteropathogens, 250 children, aged under 36 months and of both sexes, were studied; of which 162 had acute gastroenteritis. The efficacy of a rapid screening assay for bacterial enteropathogens (enteropathogenic Escherichia coli "EPEC", enteroinvasive Escherichia coli "EIEC", Salmonella spp. and Shigella spp.) was evaluated. The fecal samples were also submitted to a traditional method of stool culture for comparison. The concordance index between the two techniques, calculated using the Kappa (k) index for the above mentioned bacterial strains was 0.8859, 0.9055, 0.7932 and 0.7829 respectively. These values express an almost perfect degree of concordance for the first two and substantial concordance for the latter two, thus enabling this technique to be applied in the early diagnosis of diarrhea in infants. With a view to increasing the sensitivity and specificity of this immunological test, a study was made of the antigenic preparations obtained from two types of treatment: 1) deproteinization by heating; 2) precipitation and concentration of the lipopolysaccharide antigen (LPS) using an ethanol-acetone solution, which was then heated in the presence of sodium EDTACom o objetivo de padronizar um Dot Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (Dot-ELISA) para a detecção de antígenos de enteropatógenos bacterianos fecais, estudaram-se 250 crianças, abaixo de 36 meses de idade, de ambos os sexos, 162 portadoras de gastroenterite aguda. Avaliou-se a eficácia de um teste rápido para bactérias enteropatógenas (Escherichia coli enteropatogênica "EPEC", Escherichia coli enteroinvasora" EIEC", Salmonella spp. e Shigella spp.). As amostras fecais foram também submetidas à metodologia tradicional de coprocultura para comparação. Os índices de concordância entre as 2 técnicas, calculado através do índice Kappa (k) para as cepas bacterianas foram 0,8859; 0,9055; 0,7932 e 0,7829 respectivamente. Estes valores expressam um grau de concordância quase perfeito nos 2 primeiros casos e significante para os 2 últimos, o que permite que a técnica seja aplicada no diagnóstico precoce das diarréias infantis. Procurando-se aumentar a sensibilidade e especificidade deste teste imunológico, efetuou-se um estudo de preparações antigênicas obtidas através de 2 tipos de tratamentos: 1) desproteinização por aquecimento; 2) precipitação e concentração do antígeno lipopolissacáride (LPS) através de uma solução de etanol-acetona, com posterior aquecimento na presença de EDTA sódico

Keywords

• Infantile diarrhea
• Enteropathogens
• Fecal antigens
• Stool culture
• Dot-ELISA