Ciência Rural (Jun 2003)
Avaliação da fidelidade genotípica por marcadores RAPDs de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cv. Carrick, regeneradas in vitro Evaluation of the genotypic fidelity by RAPD markers of pear shoots (Pyrus communis L.) cv. Carrick, in vitro regenerated
Abstract
O objetivo deste trabalho foi avaliar a fidelidade genotípica de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cultivar Carrick, regeneradas in vitro, utilizando marcadores RAPDs. O DNA genômico foi extraído de folhas oriundas das brotações de pereira regeneradas a partir de diferentes tratamentos e de plantas matrizes micropropagadas (planta controle), utilizando-se o protocolo descrito por FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). Para triagem dos primers foram utilizados os kits OPAN, OPA e OPF (Operon Technologies, Inc.) e, destes, foram escolhidos sete primers: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 e OPF-04. A separação dos produtos da amplificação foi realizada através de eletroforese horizontal em gel de agarose 1,2%, corado com brometo de etídio. Após a corrida, os géis foram visualizados sobre um transiluminador de luz ultravioleta e fotografados com câmara Polaroid para registro dos dados. A ausência ou adição de uma ou mais bandas comparativamente ao padrão da planta matriz (planta controle) foi considerado variação somaclonal. Dos 66 fragmentos produzidos pelos sete primers, observou-se 100% de bandas monomórficas, indicando que nenhum dos primers utilizados detectou variação somaclonal nas brotações regeneradas.The aim of this work was to evaluate the genotypic fidelity of pear shoots (Pyrus communis L.) cultivar Carrick regenerated in vitro, using RAPD markers. Genomic DNA was extracted from leaves regenerated from pear shoots submitted to different treatments and from micropropagated matrix plants (control plant), using the protocol descripted by FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). For primer selection, the Kits OPAN, OPA, and OPF (Operon Technologies, Inc.) were used. Seven primers were chosen: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 and OPF-04. Amplified products were submitted to horizontal electrophoresis in 1.2% agarose gel, stained with ethidium bromide and visualized under UV light. The result was documented by using a Polaroid Camera. The absence or addition of bands, compared to the control plant pattern was considered somaclonal variation. The seven primers generated 66 fragments with 100% monomorphics bands indicating that none of the primers used was able to detect somaclonal variation on the regenerated shoots.
Keywords
