Revista Colombiana de Biotecnología (Jul 2002)
Obtención de vesículas de las microvellosidades del epitelio intestinal del gusano blanco de la papa Premnotrypes vorax Hustache
Abstract
La exploración del uso potencial de microorganismos como agentes de control biológico de plagas requiere estudios básicos acerca de su mecanismo de acción en el insecto blanco seleccionado. El empleo de vesículas obtenidas a partir de las microvellosidades epiteliales del intestino de los insectos (BBMVs), se ha constituido en una herramienta valiosa a nivel mundial para el estudio del mecanismo de acción de las proteínas de Bacillus thuringiensis considerado como el agente de control microbiológico por excelencia. El objetivo del presente trabajo fue normalizar una metodología para la obtención de BBMVs a partir del intestino del gusano blanco de la papa, con el fin de utilizarlas posteriormente en estudios para determinar la potencialidad de uso de proteínas de B. thuringiensis con actividad toxica hacia coleópteros, para el control biológico de este insecto. El trabajo se llevó a cabo empleando larvas de último instar de P. vorax, obtenidas de una cria de laboratorio. Se partió de la metodología propuesta por Wolfersberger et al. (1987) con modificaciones desarrolladas por los autores. Las BBMVs obtenidas se caracterizaron mediante electroforesis de proteínas SDS PAGE y microscopia electrónica de transmisión. Asi mismo, se cuantifico la cantidad de proteína total obtenida por mi de purificado. Se logro la obtención de un purificado de vesículas con tamaños y formas de características similares a los reportados en la literatura internacional por otros autores. La concentración promedio de proteína total obtenida fue de 1mg/ml, siendo adecuada para estudios de unión con proteínas de B. thuringiensis. El análisis electroforético indicó la presencia de un complejo de proteínas en el purificado con pesos moleculares que oscilan entre 24 y 116 KDa. La metodología de purificación para obtener BBMVs será empleada en estudios de unión de proteínas de B. thuringiensis con las proteínas receptoras presentes en las microvellosidades del intestino del gusano blanco de la papa.
