Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia ()
Evaluación de proteínas relacionadas con la diferenciación de células madre hematopoyéticas CD34+ obtenidas de sangre de cordón umbilical
Abstract
La sangre de cordón umbilical es una alternativa para el aislamiento y cultivo de células madre hematopoyéticas CD34+, útiles en terapias de reemplazo medular en el tratamiento de patologías neoplásicas y no neoplásicas. En este trabajo se evalúa la expresión de proteínas relacionadas con la diferenciación de células madre hematopoyéticas CD34+ en cultivo. Las muestras de sangre de cordón fueron recolectadas en bolsas con CPDA (Baxter®) y transportadas al Laboratorio de Hematología de la Facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana. El aislamiento de la células madre hematopoyéticas CD34+ se realizó mediante el uso del sistema Miltenyi biotec Microbeads® a partir de células mononucleares obtenidas por gradiente de densidad con Ficoll-Hypaque Amershan Biosciences®. Las células CD34+ se cultivaban en medio Stem Pro® suplementado con IL3, SCF y GM-CSF entre 5 y 11 días a 37 ºC y 5 % CO2. Se determinó la viabilidad celular, cambios morfológicos por microscopia invertida y la expresión de las proteínas CD34, CD33 y CD38, así como Bcl-2 y CD95 por medio de citometría de flujo. Se establecieron 6 (n=6) cultivos enriquecidos con células hematopoyéticas CD34+, con un promedio de viabilidad del 84,25 % y tiempo de cultivo entre 5 y 11 días. En la evaluación morfológica se observó la aparición de prolongaciones citoplasmáticas o seudópodos tipo magnupodia hasta el día 7 de cultivo. Se observó la co-expresión de los anfígenos CD34 y CD33, con un aumento a partir del día 7 de la proteína CD95. Las células madre hematopoyéticas CD34+ obtenidas de sangre de cordón umbilical presentan prolongaciones citoplasmáticas posiblemente relacionadas con interacciones célula a célula. En nuestro sistema de cultivo, las células madre hematopoyéticas obtenidas inician procesos de diferenciación mieloide que se relacionan indirectamente con la expresión de Bcl-2 y CD95.
