VacciMonitor (Dec 2004)
Determinación de las condiciones de ensayo óptimas en un ELISA para la detección de anticuerpos séricos IgG anti-LPS de Pseudomonas aeruginosa O11
Abstract
La selección de sueros de donantes sanos para la obtención de una gamma hiperinmune contra la infección por Pseudomona aeruginosa, así como la evaluación de la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal contra este microorganismo necesita contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas. En este trabajo se realizaron los ensayos necesarios para el montaje y la optimización de un ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos séricos de clase IgG anti- LPS de P. aeruginosa O11. Se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo, dilución de trabajo de las muestras a evaluar y del conjugado con el fin de seleccionar en cada caso las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco del ensayo. Una concentración de 1,5 μg/mL de LPS O11 en PBS toda la noche a 4 °C como recubrimiento, la necesidad de no incluir un paso adicional de bloqueo y el conjugado humano anti IgG-HRP diluido 1:3000, 1 h a 37 °C resultaron las variables óptimas para el ensayo. Por otra parte, se estableció el rango lineal de la curva del control positivo y se seleccionó la dilución de trabajo 1:100 para las muestras de sueros a evaluar.
