Entamoeba histolytica: fecal antigen capture immunoassay for the diagnosis of enteric amebiasis by a monoclonal antibody Entamoeba histolytica: imunodiagnóstico, através de captura de antígeno fecal em amebíase entérica por um anticorpo monoclonal

Abstract

Amebiasis continues to be of epidemiological importance in underdeveloped countries. Clinical diagnosis and epidemiological setting in a region are based on the fecal microscopic identification of cysts or trophozoites. This procedure requires well trained personnel, is laborious, of low sensitivity and frequently yields false-positives results. The present study was designed to develop an immuno-enzymatic fecal 96 kDa antigen capture test (COPROELISA-Eh) more sensitive and specific than microscopic diagnosis of amebiasis. Triplicates of 177 stool samples processed by the formol-ether concentration method, were defined as positive or negative by three experienced microscopic observers. Another aliquot was submitted to the antigen capture test by a monoclonal antibody against a specific membrane antigen of pathogenic strains of Entamoeba histolytica. Optical densities were interpreted as positive when they exceeded the mean value of negative samples plus two standard deviations. COPROELISA-Eh showed a 94.4% sensitivity, 98.3% specificity, 96.2% positive predictive value and 97.6% negative predictive value for the detection of E. histolytica in feces. COPROELISA-Eh is more sensitive and specific than microscopic examination, does not require specially trained personnel and allows the simultaneous processing of a large number of samples.A amebíase mantém sua importância epidemiológica em países subdesenvolvidos onde sua prevalência a converteu na parasitose de maior morbidade e mortalidade após malaria e esquistosomose. Em regra, tanto o diagnóstico clínico como os levantamentos epidemiológicos assentam na identificação microscópica de cistos e/ou trofozoítos em extractos fecais. Este procedimento requer pessoal muito bem treinado, é laborioso, e frequentemente fornece resultados contraditórios. Para obviar estas dificuldades, no presente trabalho montamos uma técnica de diagnóstico imunoenzimático baseado na captura de um antígeno de 96 kDa presente nas fezes de indivíduos infectados pela E. hystolytica (COPROELISA-Eh). Triplicatas de 117 amostras fecais processadas pelo método de concentração do formol-éter foram definidas como positivas ou negativas por três microscopistas especialistas em amebíase. Outra alíquota foi submetida ao teste de captura de antígeno por um anticorpo monoclonal contra um antígeno de 96 kDa específico de membranas de cepas patogênicas de E. histolytica. Consideramos como positivos aqueles resultados em que densidades óticas estavam acima do valor dos controles negativos mais 2 desvios padrões. COPROELISA-Eh mostrou 94.4% de sensibilidade, 98.3% de especificidade, 96.2% de valor preditivo positivo e 97.6% de valor preditivo negativo para a deteção de E. hystolytica nas fezes. Em conclusão, o método COPROELISA-Eh é mais sensível e específico do que o exame microscópico dos extratos fecais, não requer pessoal especializado na identificação morfológica das amebas, e permite o processamento de um grande número de amostras simultâneamente.

Keywords

• Entamoeba histolytica
• Amebiasis
• Immunodiagnostic
• Monoclonal antibodies
• Capture ELISA