کاربرد ایمنوگلوبولین G خالص شده پروتئین‌های پوششی و حرکتی ویروس برگ بادبزنی مو توسط ستون DEAE سلولزی برای شناسایی ویروس برگ بادبزنی مو

Abstract

در تحقیق حاضر از جدایه‌های بومی ویروس برگ بادبزنی مو (Grapevine fan leaf virus (GFLV) برای تهیه آنتی‌بادی نوترکیب استفاده شد، بدین ترتیب ژن‌های پروتئین پوششی و حرکتی ویروس تکثیر و در پلاسمید pET21a همسانه‌سازی و به باکتری (Escherichia coli (BL21) منتقل شدند. پس از بیان ژن‌های مذکور پروتئین‌های بیان شده تخلیص و برای ایمنی زایی خرگوش استفاده شدند. پس از ایمنی‌زایی توسط پروتیئن-های پوششی و حرکتی، سرم ایمن شده استخراج گردید. خالص سازی ایمنوگلوبولین G با استفاده از ستون DEAE سلولزی صورت گرفت. سپس آزمون الایزای غیر مستقیم توسط IgGهای تخلیص شده در رقت‌های 1:500، 1:1000 و 1:2000 انجام شد و نتایج نشان داد IgG پروتئین پوششی در رقت 1:500 و 1:1000 و IgG پروتئین حرکتی در رقت 1:500 بهترین واکنش را با آنتی‌ژن مربوطه نشان می‌دهد. آزمون لکه گذاری نقطه‌ای در رقت 1:500 با استفاده از هر دو IgG با غشا نیتروسلولزی قادر به ردیابی آنتی‌ژن بود. نتایج نشان داد آنتی بادی‌های تولید شده بصورت اختصاصی توانایی ردیابی GFLV را داراست.

Keywords

• آنتی بادی
• پروتئین پوششی
• پروتئین حرکتی
• ویروس برگ بادبزنی مو