不同固定剂在激光共聚焦荧光技术中的效果评价

Abstract

【目的】 探讨3种不同的固定剂在激光共聚焦免疫荧光技术中对信号表达的影响。 【方法】 对培养的NRK-52E细胞分成胞浆,胞膜及胞核抗原3组,每组用4 g/L PFA,甲醇及丙酮分别固定后,完成免疫荧光实验;原代滑膜成纤维样细胞分两组用4 g/L PFA 固定后分别用TritonX-100 和预冷的甲醇进行打孔,完成免疫荧光实验之后,使用Confocal显微镜在条件同等的情况下观察并拍摄荧光图像,以证实不同的固定剂对信号表达的影响。【结果】 胞浆蛋白α-SMA用丙酮固定时信号清晰锐利,将Actin蛋白的丝状结构表达得非常充分；胞膜蛋白ZO-1用甲醇固定处理的信号最清晰；胞核蛋白磷酸化的Smad3用4 g/L PFA固定时p-Smad3信号与细胞核具有很好的共定位关系；原代滑膜成纤维样细胞用预冷甲醇打孔处理的细胞,其磷酸化的骨架相关蛋白(P-ERM)蛋白信号明显优于用TritonX-100打孔处理的细胞。 【结论】 针对不同抗原结构特点选用固定剂;有机溶剂固定剂用于细胞支架成分的固定,交联剂固定剂用于膜相关成分的固定,同时使用交联剂固定剂及有机溶剂打孔可较好的保存抗原而获得高质量的荧光图片。

Keywords

• 细胞免疫荧光;固定剂;激光扫描共聚焦显微镜