AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA (CIM E CBM) DOS SOBRENADANTES DE CULTURA DOS LIMOSILACTOBACILLUS FERMENTUM TCUESC01 E LACTIPLANTIBACILLUS PLANTARUM TCUESC02 FRENTE AS DIFERENTES LINHAGENS DE KLEBSIELLA SPP.

Abstract

Introdução/Objetivo: A disseminação de cepas multirresistentes de Klebsiella pneumoniae (MDR) representa ameaça à saúde pública, contribuindo para elevada taxa de mortalidade e falha terapêutica mundialmente. Nosso estudo demonstrou que metabólitos presentes no sobrenadante de cepas de Limosilactobacillus fermentum TCUESC01 e Lactiplantibacillus plantarum TCUESC02, isolados da fermentação do cacau fino em Ilhéus/Bahia, podem inibir o crescimento de K. pneumoniae. Portanto, avaliou-se a ação bactericida e bacteriostática dos sobrenadantes dos Lactobacillus anteriormente descritos frente diferentes cepas e linhagens Klebsiella pneumoniae. Métodos: As estirpes de Lactobacillus foram cultivadas em caldo de Man Rogosa, and Sharpe durante 24h a 37°C em microaerofilia. Após incubação, os sobrenadantes foram obtidos via centrifugação durante 15 minutos a 8000 × g, congelados em -80°C até liofilização. Para utilização, foram reconstituídos em água ultrapura estéril e filtrados através de membranas de nitrocelulose 0,22 μm estéril. As Klebsiella pneumoniae nosocomial (ESBL positiva), Klebsiella quasipneumoniae Brisse et al. 700603 tm (MDR) e Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae (Schroeter) Trevisan 13883™ foram descongeladas e incubadas em caldo Mueller-Hinton por 24h a 37°C em aerobiose. O inóculo foi ajustado a 1 × 10 8 UFC/mL. O CIM e CBM foram determinadas pela técnica de microdiluição em caldo adaptado. Resumidamente, microplacas de 96 poços foram preenchidas com 20 μL dos sobrenadantes reconstituídos e gentamicina (controle de inibição), 70 μL de caldo MH e 10 μL de cada inóculo bacteriano sendo incubadas a 37°C. Após 24h, 10 μL da mistura foram transferidos de cada poço para placa contendo ágar MH e o CBM foi determinado pela menor concentração de sobrenadantes testados que impediram crescimento bacteriano visível. Adicionou-se 20µL de resazurina 0,01% em cada poço, 2 horas depois, realizou-se a leitura visual e em espectrofotômetro a 570 nm. Controle positivo consistiu de meio de cultura com bactérias e do meio apenas meio de cultura. Dois experimentos independentes foram realizados em quadruplicata. Resultados: Dados apontam que 80 mg/mL dos sobrenadantes foi a concentração inibitória mínima com ação bactericida. Conclusão: A concentração de 80 mg/mL demonstrou resultado bactericida para as cepas e linhagens nosocomiais de Klebsiella pneumoniae. Estudos precisam ser realizados para avaliar a ação dos sobrenadantes sobre biofilme da Klebsiella pneumoniae.

Keywords

• Lactobacillus atividade antimicrobiana Klebsiella pneumoniae ESBL resistência bacteriana