Revista Colombiana de Biotecnología (Jan 2004)
Detección de secuencias específicas de ADN de Spongospora subterranea en suelo y tubérculos de papa
Abstract
Con el fin de identificar de manera precoz el agente causal de la sarna polvosa de la papa (Spongospora subterranea fs subterranea) tanto en semillas como en suelos aptos para el cultivo de este tubérculo, se ha desarrollado una prueba basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de tres secuencias ITS (espaciadores de transcripción interna específicos del ADNr) de 372,390 y 391 pb presentes en el genoma de S. subterranea. Para ello se estandarizó una metodología de extracción y purificación de ADN del microorganismo a partir de tejido vegetal infectado (agallas de raíz de papa y pústulas en papa) obtenido en pruebas de propagación del patógeno en invernadero. Una vez optimizada la PCR y determinada su sensibilidad, se validó la metodología molecular examinando muestras de tejido vegetal infectado y suelo infestado por el patógeno, provenientes de los departamentos de Cundinamarca y Nariño. La PCR detectó ADN del microorganismo tanto en el material vegetal infectado, como en las muestras de suelo analizadas (las 30 submuestras del área experimental fueron PCR positivas). Estos resultados muestran que dicha metodología se presenta no sólo como una técnica útil para la detección rápida del patógeno en suelo, sino también como una herramienta para determinar la presencia del microorganismo en suelos declarados libres de éste y como una alternativa eficaz para el control de calidad en la producción de semilla certificada de papa libre del patógeno. Palabras clave: sarna polvosa, quistosoros, espaciador de transcripción interna, PCR, plasmodiofóridos.
