Priprava s peroksidazo konjugiranih monoklonskih protiteles proti kokošjim imunoglobulinom razreda G (IgY)

Abstract

V intenzivni perutninski proizvodnji so okužbe s patogenimi mikroorganizmi relativno pogoste in lahko povzročajo veliko gospodarsko škodo. Večino okužb z bakterijami in virusi je mogoče ugotoviti posredno z dokazom specifičnih protiteles. Največ se uporabljajo posredni imunoencimski preskusi, v katerih se v serumu dokazujejo specifična protitelesa iz razreda imunoglobulinov Y (IgY), ki so ptičji homolog sesalskemu razredu G (IgG). V takih preskusih so poleg specifičnih antigenov potrebna tudi z encimom označena protitelesa, ki se vežejo na IgY. Iz rumenjaka kokošjega jajca smo izolirali IgY, z njimi imunizirali miš BALB/c in pripravili monoklonska protitelesa (mAb) proti kokošjim IgY ter jih označili kot mAb M2. Mab M2 so reagirala s kokošjimi, puranjimi, fazanjimi in pavjimi IgY. Determinanta, ki jo prepoznavajo mAb M2, je na težki verigi IgY molekule in verjetno ni glikozilirana. Pridobljenim mAb M2 smo določili optimalno pH vrednost, optimalno delovno koncentracijo v neposrednem imunoencimskem preskusu in ocenili afiniteto vezave. MAb M2 smo konjugirali s hrenovo peroksidazo in preizkusili delovanje konjugata, imenovanega M2-p. M2-p se je vezal na kokošje IgY v pH območju 3-11, kar kaže na visoko afiniteto vezanja. Dosedanji rezultati kažejo, da je M2-p primeren za imunoencimske preskuse s katerimi dokazujejo specifična protiteles razreda IgY pri kokoših, puranih, fazanih in pavih.

Keywords

• perutnina
• imunologija
• imunoglobulini Y
• monoklonska protitelesa
• konjugacija
• peroksidaza