Análisis de la unión de la toxina Cry11Bb1 de bacillus thuringiensis subesp. Medellín a vesículas del epitelio en borde de cepillo del mosquito Aedes aegypti

Abstract

Las proteínas Cry11 son producidas por Bacillus thuringiensis, estas son potentes toxinas insecticidas contra larvas de mosquitos y su modo de acción se cree que es similar al de las toxinas del tipo Cry1, las cuales interactúan con el intestino medio de larvas de lepidópteros. En este trabajo, se estudió la interacción de la toxina de 94 kDa Cry11Bb de Bacillus thuringiensis subesp. medellin con el epitelio intestinal de larvas del mosquito Aedes aegypti utilizando vesículas de la membrana en borde de cepillo (VMBC). Un intermediario de la protoxina Cry11Bb de 68 kDa, y su forma activa 30/35 kDa se marcaron con Iodo-radioactivo e incubaron con las VMBC del mosquito. La protoxina marcada (125I-68 kDa) interactuó específicamente con las vesículas y los experimentos de saturación en presencia de cantidades crecientes de vesículas mostraron que la interacción vesícula-125I-68 kDa fue saturable en el rango entre 10 a 80 ?g de VMBC. En contraste, la toxina marcada (125I-30/35 kDa) no mostró ni unión específica, ni saturabilidad en la interacción. Adicionalmente, la toxina fue susceptible al ataque de las proteasas presentes en las vesículas y mediante la técnica de dynamic Light scattering, se evidenció que la toxina se presenta como un agregado proteico. Los resultados sugieren que la protoxina Cry11Bb de 68 kDa podría determinar la especificidad de la interacción y después de la unión ésta ser procesada hacia una forma funcional de 30/35 kDa capaz de interactuar con los lípidos de la membrana y generar, mediante la formación de poros, el desbalance osmótico que lleva a la muerte a las larvas de mosquitos.