Nachweis und Quantifizierung von PCV-3 in österreichischen Schweinen mittels duplex Real-Time PCR

Abstract

Das porzine Circovirus 3 (PCV-3) ist ein zirkuläres DNA-Virus, welches im Jahr 2015 in den USA erstmals in Schweinen nachgewiesen wurde. Es gehört gemeinsam mit den porzinen Circoviren 1, 2 und 4 zur Familie Circoviridae. PCV-3 ist global verbreitet und wurde in diversen europäischen, asiatischen und amerikanischen Ländern nachgewiesen. Die Pathogenität des Virus wird bislang kontrovers diskutiert.In der vorliegenden Arbeit wurde eine bereits publizierte PCV-3 Real-Time PCR-Methode durch Einbeziehung eines parallelen Tests zum Nachweis einer endogenen Kontrolle an die Erfordernisse der klinischen Diagnostik angepasst (PCV-3/β-Aktin duplex Real-Time PCR) und validiert. Mit dieser Methode wurden in der Folge Proben österreichischer Schweine auf das Vorkommen von PCV-3-DNA getestet.Eine sensitive (Detektionslimit: 25 Kopien/PCR) und spezifische duplex Real-Time PCR zur Detektion von PCV-3 und β-Aktin als endogene Kontrolle wurde etabliert. Anschließend wurden 27 Seren von gesunden Ebern sowie 30 Seren und Organpools von 119 kranken Schweinen verschiedenen Alters und Organpools von 41 Aborten auf PCV-3 getestet und die positiven Proben anschließend quantifiziert. Dabei wurden 15,4 % der Seren gesunder Eber, 6,7 % der Seren sowie 12,6 % der Organpools kranker Schweine und 9,8 % der Aborte positiv auf PCV-3 getestet. Die Quantifizierung der Proben gab mit 9,1 x 108 Kopien/ml die höchste Viruslast in einer Abortprobe, sämtliche positiv getesteten Seren blieben unterhalb des Quantifizierungslimits von 250 Kopien/PCR.

Keywords

• Porzines Circovirus 3
• Validierung
• klinische Proben
• Quantifizierung