Diseño de un panel multicolor para evaluar moléculas intracelulares y de superficie mediante citometría de flujo

Abstract

Introducción. La citometría de flujo permite detectar la presencia de moléculas intracelulares y de superficie, de forma simultánea sobre cada célula. Objetivo. Describir un método para la construcción armónica de un panel multicolor con 11 parámetros para el análisis fenotípico y funcional de linfocitos T (LT) CD8+ por citometría de flujo. Materiales y métodos. Para la construcción del panel multicolor, se seleccionaron las moléculas y se titularon los conjugados con fluorocromos para la determinación de CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27, CD45RA, CD95 y CD127, en células mononucleares de sangre periférica. Para la evaluación del panel, se hizo la construcción progresiva adicionando uno a uno los conjugados y la fluorescencia menos uno (FMO). Este método fue aplicado para células ex vivo y para evaluar la producción de IFNγ, IL-2 y TNFα frente al estímulo con la enterotoxina B de Staphylococcus aureus (SEB) y al antígeno crudo de Trypanosoma cruzi. Finalmente, se procedió al análisis de las subpoblaciones de LT CD8+ ex vivo en individuos sanos. Resultados. La evaluación de las moléculas con los conjugados no mostró interferencia en las señales de fluorescencia. Las frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8+ evaluadas fueron cercanas a los valores reportados en otros estudios. Además, se observó que la frecuencia de LT CD8+ productores de IFNγ, IL-2 y TNFα fue mayor a las seis horas de cultivo con SEB y con el antígeno crudo de T. cruzi. Conclusiones. El método aplicado para la construcción del panel multicolor permite obtener frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8+ que corresponden a lo reportado en la literatura científica. doi: http://dx.doi.org/10.7705/biomedica.v33i4.1709