Клиническая онкогематология (Apr 2024)
Ксенотрансплантация гемопоэтических стволовых клеток человека мышам линии NBSGW: базовая модель для доклинической разработки подходов генной терапии
Abstract
Актуальность. Генная терапия на основе трансплантации кроветворных клеток становится мощной и универсальной стратегией лечения все более расширяющегося спектра различных заболеваний человека. Одна из актуальных проблем при внедрении технологий модификации генома в гемопоэтических стволовых клетках (ГСК) в клиническую практику — обеспечение качества и безопасности продуктов генной и клеточной терапии при их использовании у человека. Это достигается путем тестирования на животных моделях на этапе доклинических исследований. В этом отношении линия мышей NBSGW представляется уникальной и перспективной моделью, которая позволяет обеспечивать приживление ГСК человека без предварительного кондиционирования. Цель. Апробация модели мышей NBSGW для приживления ГСК человека, оптимизация методов оценки состояния животных и мониторинга уровня химеризма для трансляционной доклинической разработки продуктов генной и клеточной терапии на основе ГСК. Материалы и методы. Для создания моделей ксенотрансплантатов мышей NBSGW использовали образцы отобранных CD34+ ГСК периферической крови здорового донора. Серийную трансплантацию проводили методом внутривенной инъекции клеток костного мозга от первичных реципиентов с высоким уровнем химеризма. Эффективность приживления оценивали методами проточной цитофлюориметрии (ПЦФ) и цифровой капельной полимеразной цепной реакции (цкПЦР). Субпопуляционный состав приживления клеток человека оценивали с помощью ПЦФ. Результаты. Апробированный протокол трансплантации ГСК отличается благоприятным профилем токсичности. По результатам ПЦФ у всех мышей исследуемой выборки отмечалось долгосрочное приживление клеток человека с высоким уровнем химеризма (23,5–93,6 %) в костном мозге животных, в т. ч. после серийной трансплантации, что было подтверждено данными цкПЦР. Зафиксировано преобладание клеток B-линейной дифференцировки во всех протестированных образцах (периферической крови, костного мозга, селезенки) мышей после первичной и серийной трансплантаций. Метод цкПЦР может использоваться как дополнительный способ валидации данных об уровне приживления клеток человека, полученных с помощью ПЦФ. Заключение. Мыши NBSGW являются перспективной базовой моделью доклинической разработки продуктов генной и клеточной терапии на основе первичных ГСК человека с модифицированным геномом.
Keywords
