视黄酸-AP-1信号通路对视网膜色素上皮细胞分泌TGF-β2的调控机制

Abstract

【目的】研究上调视黄酸（RA）信号以及抑制活化蛋白-1（AP-1）转录活性对RPE分泌转化生长因子β2（TGF-β2）的影响以及可能的作用途径。【方法】①检测ATRA干预的作用，将ARPE-19细胞分为：正常对照组和6、12、24、48h组，用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、western blot和免疫荧光检测RARβ和c-Fos的表达。②检测RARβ抑制剂LE540对ATRA诱导后细胞表达RARβ和c-Fos的影响，将ARPE-19细胞分为：正常对照组，ATRA组，LE540组和ATRA+LE540组，用RT-qPCR和western blot检测RARβ和c-Fos的表达。③检测AP-1抑制剂T-5224干预的作用，将ARPE-19细胞分为：正常对照组和12、24、48h组，用电泳迁移率变动分析法（EM?SA）检测RPE细胞中AP-1活性。④检测LE540和T-5224对ATRA诱导后细胞表达和分泌TGF-β2的影响，将ARPE-19细胞分为正常对照组，ATRA组，ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组，用western blot和酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测TGF-β2的表达和分泌量。【结果】ATRA干预24和48h后，RARβ的表达较对照组明显升高（P＜0.05），c-Fos的表达先升后降，ATRA干预6和12h后，c-Fos表达明显升高（P＜0.01），而干预48h后，c-Fos表达下降，与对照组相比无统计学差异（P＞0.05）；T-5224干预24和48h后，AP-1的转录活性明显下降（P＜0.01）。用LE540和T-5224干预48h后，ATRA+LE540组和ATRA+T-5224组TGF-β2的表达较ATRA组明显下降（P＜0.05）。【结论】ATRA通过RARβ影响AP-1的转录活性，进而促进ARPE-19细胞分泌TGF-β2。

Keywords

• 视黄酸;近视;视网膜色素上皮细胞;AP-1;TGF-β2