DESENVOLVIMENTO DE APTÂMEROS DE DNA CONTRA ACINETOBACTER BAUMANII MULTIDROGAS RESISTENTES

Abstract

Introdução/Objetivo: As infecções causadas por agentes multirresistentes são um problema de saúde mundial, com altas taxas de mortalidade. A identificação rápida dessas infecções é essencial, devido à sua natureza contagiosa, dificuldade de tratamento e custos hospitalares. Para abordar esse desafio, o desenvolvimento de métodos de detecção rápidos e acessíveis, bem como terapias alternativas, são necessários. Uma solução promissora é o uso de aptâmeros, que são moléculas capazes de interagir com bactérias. Esses aptâmeros têm potencial para reconhecer agentes infecciosos e/ou inibir suas funções. O objetivo desse estudo foi selecionar e identificar aptâmeros capazes de se ligar a células de A. baumannii multirresistentes. Métodos: Uma cepa de A. baumannii isolada de amostra clínica foi submetida ao protocolo de cell-SELEX. O sucesso das rodadas de seleção foi acompanhado por RT-PCR (curva de melting comparada com controle positivo) e citometria de fluxo com aptâmeros marcados com FAM (deslocamento de pico de fluorescência indicando ligação dos aptâmeros às células). Os aptâmeros foram identificados por sequenciamento utilizando a plataforma illumina. Resultados: Primeiramente, otimizamos uma metodologia interna, previamente descrita, baseada em cell-SELEX, para identificação de aptâmeros com execução rápida e baixo custo. Foram realizadas 15 rodadas de cell-SELEX, sendo duas negativas utilizando células de K. pneumoniae. Os ensaios de citometria de fluxo revelaram que após a 15ª rodada além dos aptâmeros selecionados se ligarem à célula alvo, eles também apresentaram preferência de ligação quando comparados com o controle negativo. O sequenciamento revelou as 10 sequencias mais frequentemente encontradas após a seleção na 13ª e 15ª rodada, sugerindo os aptâmeros mais selecionados para ligação às células alvo e provavelmente os melhores candidatos. Os aptâmeros que se mantiveram nas duas rodadas e que aumentaram o número de cópias na 15ª com relação à 13ª foram selecionados. A avaliação inicial da estrutura tridimensional revelou que 3 aptâmeros apresentavam estruturas similares, indicando uma possível convergência na seleção. Testes de confirmação da especificidade e sensibilidade para cada novo aptâmero identificado estão sendo realizados. Conclusão: Esses dados indicam que em breve a tecnologia baseada em aptâmero pode se tornar uma alternativa tangível às abordagens tradicionais ao diagnóstico e terapia de bactérias multirresistentes como A. baumanni.

Keywords

• Resistência aptâmeros
• Acinetobacter baumannii cell-SELEX