腺病毒携带人内皮抑素基因在舌癌细胞和血管内皮细胞中的表达

Abstract

【目的】以腺病毒携带的人内皮抑素基因-Endostatin 基因( Ad/hEnd)感染舌癌细胞株 Tca8113 和人脐静脉内皮细胞株 ECV304, 观察其在舌癌细胞和静脉内皮细胞株中的表达。【方法】用 293 细胞扩增Ad/hEnd,并抽提、纯化。以 10 MOI 的 Ad/GFP 感染 ECV 细胞,观 察细胞中表达绿色荧光蛋白的细胞所占的比例。采用免疫组化法检测 Endostatin 蛋白在感染了Ad/hEnd 的 Tca 细胞和 ECV 细胞中的表达Ad/hEnd 感染 Tca 细胞后收集细胞培养液上清, ELISA 检测上清中 Endostatin 蛋白含量。Western-blot 检测 Endostatin 蛋白在 Tca 和 ECV 细 胞中的表达。【结果】扩增的Ad/hEnd 通过空斑形成试验准确测定其滴度可达 1×1010～ 8×1010 PFU/mL。表达绿色荧光蛋白的细胞所占的 比例为 31%。实验显示感染 Ad/hEnd 后,在 Tca 细胞和ECV 细胞胞浆内有 Endostatin 蛋白合成。细胞培养液上清中 Endostatin 蛋白表达浓 度呈时间剂量依赖关系,最高达到 597 μ g/L。 Western-blot 检测显示 Endostatin 蛋白可在两种细胞中高效表达,相对分子质量与自然 Endostatin蛋白一致,无杂合蛋白,呈剂量依赖关系, 且持续到第 7 天仍呈明显的 Endostatin 蛋白质条带。【结论】本实验制备的重组腺病毒 Ad/ hEnd能在舌癌细胞和血管内皮细胞中有效表达 Endostatin 蛋白,可用于抗肿瘤血管生成的 Endostatin 基因治疗的实验研究。