缺氧条件下乙酰肝素酶抑制剂 PI-88 对人视网膜血管内皮细胞自噬的影响

Abstract

【目的】探讨乙酰肝素酶（Hpa）竞争性抑制剂PI-88在缺氧条件下对人视网膜血管内皮细胞（HREC）自噬水平的影响。【方法】以HREC为研究对象，设置3组：正常组，缺氧组（CoCl2处理的缺氧组）和实验组（CoCl2+PI-88组）。观察免疫荧光染色检测自噬体特异性标记物LC3蛋白的表达；Westernblot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ的表达；通过GFP-LC3腺病毒转染HREC，直接观察活细胞中由GFP-LC3标记的自噬水平。【结果】缺氧状态下，HREC内自噬标记蛋白LC3表达水平上调，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（灰度值，与正常组比较，4.69±0.54比2.14±0.33，P=0.001<0.05），表明LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化明显增加。Hpa抑制剂PI-88可以抑制HREC的LC3表达，使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降（灰度值，与缺氧组比较，3.51±0.20比4.69±0.54，P=0.027<0.05），表明LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化水平下降，且活细胞内自噬体的形成减少。【结论】在缺氧状态下，抑制乙酰肝素酶可下调HREC中的自噬水平。

Keywords

• 乙酰肝素酶;PI-88;人视网膜血管内皮细胞;自噬;缺氧