Cukurova Medical Journal (Sep 2019)
Üreazın modifiye edilmiş florisile kovalent immobilizasyonu ve serbest ve immobilize üreazın karakterizasyonu
Abstract
Amaç:Bu çalışmada Canavalia ensiformis kaynaklı üreazın modifiye edilmiş Florisil’e (magnezyum silikat) kovalent immobilize edilmesi ve immobilize üreazın karakterizasyonunun yapılarak biyoreaktör uygulamalarında kullanılabilirliğinin araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem:Florisil, 3-aminopropiltrietoksisilan ile aktifleştirilmiş daha sonra glutaraldehit ile modifiye edilmiştir. Modifiye edilmiş desteğe üreaz kovalent immobilize edilmiştir. İmmobilize enzimin ve desteğin taramalı elektron mikroskobunda görüntüleri incelenmiştir. Serbest ve immobilize üreazın optimum pH’sı, sıcaklığı, kinetik parametreleri (Km, Vmax, kcat/Km) belirlenmiş, 4°C’de ve oda sıcaklığında depolama kararlılıkları incelenmiştir. İmmobilize üreazın kesikli tip reaktörde tekrar kullanılabilirliği araştırılmıştır.Bulgular:Serbest ve immobilize üreaz için optimum pH sırasıyla 7,0 ve 6,5; sıcaklık ise 50 ve 60°C olarak belirlenmiştir. İmmobilizasyondan sonra enzimin Km değeri 2,2 kat artmıştır. İmmobilize üreazın katalitik etkinliği, serbest üreazın katalitik etkinliğinin %.0,1’i kadar bulunmuştur. Oda sıcaklığında ve 4°C’de serbest üreaz 5 gün sonunda ve aktivitesini tamamen kaybederken immobilize üreaz 19 gün sonunda aktivitesini kaybetmemiştir. İmmobilize üreaz kesikli tip biyoreaktörde 10 kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin %50’sini korumuştur. Sonuç:Modifiye Florisile kovalent immobilize edilen üreazın serbest üreaza göre düşük katalitik aktivite göstermesine rağmen, immobilize üreazın serbest üreaza göre depolama kararlılığının yüksek olması ve biyoreaktör uygulamalarında tekrar kullanılabilmesi nedeniyle immobilize üreazın kullanım potansiyeli yüksektir.
Keywords
