وضع الشروط المثلى لتفاعل PCR للكشف عن التعدد الشكلي M235T لـ جين الأنجيوتنسينوجين لدى مرضى ارتفاع التوتر الشرياني

Abstract

الخلفية: إن تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) إجراء حساس ذو تكلفة مادية عالية, ويتطلب نجاحه القيام بالعديد من المحاولات, تهدف هذه الدراسة إلى وضع استراتيجيات التحسين المثلى لتضخيم تسلسل محدد في جين AGT, للكشف عن التعدد الشكلي M235T المرتبط بارتفاع التوتر الشرياني. المواد والطرق: تم استخلاص الحمض النووي الجينومي بطريقة الأعمدة, وأجري تفاعل PCR باستخدام مشارع نوعية خاصة, وبتطبيق شروط مختلفة, وجرى الكشف عن منتجات PCR باستخدام هلام الآغاروز الكهربائي. النتائج: كانت شروط الدوار الحراري المثالية لإجراء تفاعل PCR كالتالي: التمسخ الأولي (الحرارة 94 °C, المدة 2 دقيقة), التمسخ (94 °C,30 ثانية, 30 دورة), التلدين (60 °C,30 ثانية, 30 دورة), الاطالة (72 °C, 30 ثانية,30 دورة), الاطالة النهائية (72 °C,5 دقائق). أما التراكيز والحجوم المثالية للكواشف فكانت كالتالي: المزيج الرئيسي (10 ميكروليتر), المشرع الامامي والعكسي(3.5 ميكروليتر من كل منهما بتركيز 21 بيكومول), قالب DNA (2 ميكروليتر بتركيز 30- 50 نانوغرام⁄ ميكروليتر). الخلاصة: كان لتعديل درجة حرارة التلدين وتركيز البوادئ وشروط الدوار الحراري الدور الأكبر في ضبط شروط PCR, ولم يكن هناك حاجة لإجراء تعديل على تراكيز الكواشف الأخرى, ولا لاستخدام كميات إضافية من كلور المغنزيوم أو الإضافات الأخرى لتعزيز التفاعل.