Evaluation of real time PCR technique to diagnosis of human T-lymphotropic virus type I (HTLV-I) in patients in the Hematologia da Fundação Hemope Hospital, in Northeastern Brazil Avaliação da técnica de PCR em tempo real para o diagnóstico do virus linfotrópico tipo I de células T humana (HTLV-I) em pacientes do Hospital de Hematologia da Fundação Hemope, no Nordeste do Brasil

Abstract

As a high degree of homology exists between the proviral genomes of HTLV-I and HTLV-II, there is significant cross-reactivity. Therefore although detection of HTLV antibodies is characteristic of viral infection, it is not sufficient to confirm the presence of the viral type. Molecular tests used to diagnose the HTLV-I/II viruses are based on investigations of proviral genomic sequences, and allow for an infection to be diagnosed prior to the appearance of any sign or symptom. The HTLV proviral load in infected individuals can be determined using real-time PCR, a faster method with less risk of contamination than simple or nested PCR. We analyzed 63 samples from the Hemope Hospital, of which 33 were from HTLV seropositive individuals and 30 from blood donors, to determine the type of virus and the proviral load. The sensitivity of qualitative PCR in comparison to ELISA was 87.5% (95% IC: 70.1 - 95.9%) and the specificity was 100% (IC 95%: 85.9 - 100.0%). The sensitivity and specificity of real-time PCR in comparison to the serological test (ELISA) were 100% (95% IC: 86.7 - 100.0%) and 96.67% (95% IC: 80.9 - 99.8%) respectively. The proviral load in the seropositive individuals ranged from 13 to 343820 copies/106 PBMC cells. Our study also observed that individuals with TSP/HAM had a higher proviral load than those who showed no symptoms. The use of real time PCR for routine clinical testing of infected individuals will play a significant role in identifying the virus type and determining the proviral load, thereby providing more appropriate treatment.Como os genomas provirais do HTLV-I e HTLV-II exibem grande homologia, há uma expressiva sororeatividade cruzada. Assim, a detecção de anticorpos anti-HTLV-I/II embora caracterize infecção viral, não permite estabelecer distinção entre os agentes. Os testes moleculares empregados para o diagnóstico dos vírus HTLV-I/II, baseiam-se na pesquisa de seqüências genômicas provirais permitindo o diagnóstico da infecção antes de aparecer sinal ou sintoma. A carga proviral de HTLV pode ser determinada através da utilização da PCR em tempo real, uma técnica rápida e com menor risco de contaminação que a PCR simples ou nested PCR. Analisamos, 63 amostras do Hospital HEMOPE, das quais 33 foram de indivíduos com sorologia reagente para HTLV e 30 de doadores de sangue, para determinar o tipo de vírus e a carga proviral. A sensibilidade da PCR qualitativa em relação ao ELISA foi de 87,9% (IC 95%: 70,9-96,0%) e a especificidade foi de 100% (IC 95%: 85,9-100,0%). A sensibilidade e especificidade da PCR em tempo real foram de 100% (IC 95%: 86,7-100,0%) e 96,67% (IC 95%: 80,9-99,8%), respectivamente. A carga proviral variou entre 13 cópias/10(6) células PBMC e 343820 cópias/10(6) células PBMC. Nosso estudo também observou que os indivíduos com PET/MAH tiveram carga proviral mais elevada que a dos indivíduos assintomáticos. A utilização da PCR em tempo real na rotina clínica dos indivíduos infectados poderá desempenhar um papel relevante na identificação do vírus e na determinação da carga proviral, contribuindo para direcionar um tratamento adequado.

Keywords

• Vírus linfotrópico T humano
• infecções por HTLV-I
• diagnóstico molecular
• reação em cadeia da polimerase
• Human T-cell lymphotropic virus
• HTLV-I infections
• molecular diagnosis
• polymerase chain reaction