Biological Journal of Microorganism (Nov 2016)
بررسی مقایسه‌ای شناسایی شیگلا فلکسنری از طریق روش رنگ‌سنجی بر پایۀ نانوذرات طلا و الکتروفورز
Abstract
مقدمه: شیگلا باسیل گرم‌منفی روده‌ای است که عفونت‌های ناشی از آن مشکلات جدی را در کشورهای پیشرفته و در حال توسعه ایجاد کرده است. هدف از این مطالعه، به‌کارگیری روش رنگ‌سنجی بر پایۀ نانوذرات طلا جهت تشخیص سریع شیگلا فلکسنری با استفاده از محصول تکثیریافتۀ ژن ipaH است. مواد و روش‌ها: در این مطالعه برای شناسایی جنس شیگلا از یک جفت آغازگر اختصاصی برای تکثیر ژن ipaH به‌روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز استفاده شد. سپس از پروب تک‌رشته‌ای، جهت اتصال به نواحی اختصاصی محصول این واکنش استفاده شد. در مرحلۀ بعد نانوذرات طلا به مخلوط واکنش افزوده شدند و تغییر رنگ محلول به‌صورت چشمی و با استفاده از میکروسکوپ الکترونی روبشی بررسی شد. جهت بررسی حساسیت این روش، از محصول واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با رقت‌های مختلف استفاده شد و نتایج با روش ژل الکتروفورز مقایسه شد. نتایج: هیبریداسیون پروب با محصول تکثیریافته از ژن ipaH باعث تجمع نانوذرات طلا به‌شکل شبکه‌ای متصل به هم شد و درنتیجه منجر به تغییر رنگ مخلوط واکنش از قرمز به بنفش شد که این تغییر رنگ نشان‌دهندۀ وجود باکتری شیگلا فلکسنری در نمونه بود، درحالی‌که هیچ تغییر رنگی در موارد کنترل منفی مشاهده نشد. همچنین تجمع نانوذرات طلا با استفاده از تصویر میکروسکوپ الکترونی روبشی تأیید شد. بحث و نتیجه‌گیری: به‌دلیل اختصاصی‌بودن ژن ipaH در گونۀ شیگلا فلکسنری، روش رنگ‌سنجی بر پایۀ نانوذرات طلا می‌تواند به‌عنوان روشی سریع و کاربردی با حساسیت بالا، برای شناسایی اختصاصی این باکتری در نمونه‌های بالینی و مواد غذایی استفاده شود.
