PCR 循环测序法检测 Kras 和 HCV 5′ 非 编 码 区 基 因 变 异

Abstract

目的: 建立一种简单、快速、可靠的 DNA 序列分析方法,并利用此方法分析 K-ras基因和HCV 5′非编码区基因的变 异情况。方法: PCR 循环测序法是将 PCR 扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理,建立了以 PCR 扩增 引物为测序引物, 利用 Taq DNA 聚合酶、荧光标记的 2′ , 3′ -双脱氧核苷三磷酸( ddNTP)直接进行 PCR 扩增产物序列分析的方 法。应用该方法对人肺癌组织中的 K-ras癌基因和丙型肝炎病毒 5′ 非编码区(HCV 5′ -NTR)进行了序列测定。结果: 肺癌组织中 的 K-ras 基因第 1 外显子第 35位碱基发生点突变( GGT ※GAT); 属于高度保守区的HCV 5′ -NTR 存在基因变异。结论: PCR 循 环测序法具有简单、快速、结果可靠等特点, 为基因突变的检测和病原体的核酸序列分析提供了一个快速实用的方法。