随机引物PCR 检测人DNA 指纹条件的优化

Abstract

【目的】探讨随机引物PCR 检测人DNA 指纹技术的最优化条件。【方法】应用随机引物PCR 技术, 用一对经筛 选的短引物, 对扩增人DNA 指纹的条件进行了优化。【结果】实验结果显示:DNA 模板应新鲜, 质量浓度在50 ～ 550 mg/ L 均 有扩增产物。dNTP 的浓度0.2 mmo l/ L 最宜。Mg2 +浓度5.0 mmol/ L 效果最佳。循环参数以两个三步PCR, 变性温度分别 用94 ℃、90 ℃, 时间各为30 s, 退火温度用43 ℃、48 ℃, 时间分别为40 s 、50 s, 延伸温度用72 ℃, 时间分别为1 min、1 min 20 s 。【结论】按照优化的实验条件, 得出的DNA 指纹图重复性好, 个体特异性高, 为APHDF 的推广提供了实验基础。