Exposure of different cryoprotectants and concentrations on diameter and number of the granulosa cells of bovine preantral follicles Exposição de diferentes crioprotetores e concentrações sobre o diâmetro e número de células da granulosa de folículos pré-antrais bovinos

Abstract

This study evaluated the effect of glycerol (GLY), dimethyl sulfoxide (DMSO) and propylene glycol (PROH) in diameter of follicle, of oocyte and of granulosa cells number of preantral follicles cattle. Ovarian fragments were exposed to cryoprotectants at concentrations of 20 and 40% for 10 min. Then, the tissue was fixed in Carnoy and processed by traditional technique of histology. Slides were stained by hematoxylin and eosin and evaluated under optical microscope equipped with eyes wide with morphometric. Data were analyzed by ANOVA and Tukey test. Regarding diameter of the follicle, no difference was found among the control and the groups exposed to the cryoprotectants. However, in relation to the diameter of the oocyte, 40% concentration in all tested cryoprotectants the primary follicles showed reduction in diameter, including 20% of propylene glycol. For primary follicles, only 40% of glycerol presented difference from control group. For the granulosa cells 40% of DMSO and 20 and 40% of PROH showed significant reduction compared to control group, in primary follicles. In conclusion primary follicles were resistant to cryoprotectants effects. For the primary structures, glycerol, dimethyl sulfoxide and propylene glycol led to reduction of diameter of oocyte and number of granulosa cells but not of follicular diameter.O objetivo, no presente estudo, foi avaliar o efeito do glicerol (GLI), dimetilsulfóxido (DMSO) e propilenoglicol (PROH) sobre o diâmetro do folículo, do ovócito e do número de células da granulosa de folículos pré-antrais bovinos. Fragmentos ovarianos foram imediatamente fixados em Carnoy (controle) ou expostos aos crioprotetores nas concentrações de 20 e 40%, por 10min. Após o período de exposição, o tecido ovariano também foi fixado em Carnoy e processado para inclusão em parafina. As secções (5) de tecido ovariano foram coradas em hematoxilina e eosina e analisadas ao microscópio de luz com ocular em escala micrométrica. Os dados foram analisados por ANOVA e teste Tukey. Em relação ao diâmetro do folículo primordial, nenhuma diferença foi encontrada entre o controle e os grupos expostos aos crioprotetores. Entretanto, em relação ao diâmetro do ovócito, na concentração de 40%, para todos os crioprotetores testados, os ovócitos primordiais apresentaram redução significativa do diâmetro, o que incluiu o PROH a 20%. Nas estruturas primárias, ocorreu redução dos ovócitos e folículos somente com o glicerol a 40%. Com relação ao número de células da granulosa das estruturas primordiais, o DMSO a 40% e o PROH a 20 e 40% levaram a redução significativa do diâmetro dos ovócitos e folículos em comparação ao grupo controle. Os folículos primários, para todos os crioprotetores testados, não apresentaram alterações quanto ao número de células da granulosa. Em conclusão, os folículos primários mostraram-se resistentes aos efeitos dos crioprotetores. Em relação aos folículos primordiais, o glicerol, dimetilsulfóxido e propilenoglicol levaram à redução do diâmetro do ovócito e do número de células da granulosa, mas não do diâmetro folicular.