بیان پروتئین پوششی ویروس ایرانی پیچیدگی بوته چغندرقند در باکتری Escherichia coli

Abstract

بیماری پیچیدگی بوته چغندرقند در ایران با دو گونه ویروس ایرانی پیچیدگی بوته چغندرقند (Beet curly top Iran virus, BCTIV) و ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند (BCTVBeet curly top virus,)ایجاد می­ شود. به منظور بیان پروتئین پوششی BCTIV، قطعه کامل چارچوب خوانش V1 اینویروس، با تعبیه محل­ های برشی دو آنزیم Bam HIو Hind III به ترتیب در انتهای ¢5 آغازگرهای اختصاصی رو به جلو و معکوس چارچوب خوانش V1، تکثیر شد. قطعه 751 جفت بازی محصول واکنش زنجیره­ای پلی­مراز، خالص شده و در ناقل همسانه­ سازی pTZ57R/T جای داده شد. توالی چارچوب خوانش V1 با واکنش هضم آنزیمی از ناقل همسانه­ سازی جدا و در ناقل بیان باکتریایی pQE30 همراه با یک دنباله هیستدینی در انتهای آمینی، جای داده شد. پلاسمیدهای نوترکیب حاوی توالی 6×His-V1، با استفاده از روش شوک الکتریکی به سلول­ های سویه M15 باکتری Escherichiacoli انتقال داده شدند. القای بیان توالی چارچوب خوانش V1 با استفاده از افزودن ایزوپروپیلتیو-دی-گالاکتوزیدبه محیط کشت LB مایع حاوی سلول­ های تراریخت باکتری صورت پذیرفت. الکتروفورز عمودی در ژل پلی­آکریل­آمید حاوی SDS، نشان­ دهنده وجود یک باند پروتئینی قوی به اندازه تقریبی 30 کیلودالتون بود که با وزن مولکولی مورد انتظار برای پروتئین پوششی BCTIV همخوانی داشت. آزمون لکه‌گذاری پروتئین با استفاده از آنتی­بادی آنتی­-هیستدین، صحت پروتئین بیان شده را به اثبات رساند. با توجه به میزان بالای خسارت حاصل از این ویروس­ ها در کشت چغندرقند، استفاده از پروتئین پوششی بیان شده BCTIVدر تولید آنتی­بادی­ اختصاصی می­ تواند روشی سریع، ارزان و ساده را برای شناسایی ویروس­ های پیچیدگی بوته چغندرقند در آزمون‌های سرولوژیکی از جمله الیزا فراهم آورد.

Keywords

• ویروس پیچیدگی بوته چغندرقند
• ویروس ایرانی پیچیدگی بوته چغندرقند
• پروتئین پوششی
• بیان پروتئین