长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖表型的影响

Abstract

目的探讨长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖表型的影响。方法收集2022年1月至2022年12月于海南医学院附属海南医院行滑膜清理术或膝关节置换术的4例RA患者及3例创伤性关节炎废弃滑膜组织，分离培养并鉴定FLS细胞。通过qPCR法检测RA组和创伤组滑膜细胞内LncRNA GAPLINC表达水平。利用siRNA干扰技术靶向敲低GAPLINC表达，通过EdU法检测各组细胞增殖水平、流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布情况。通过qPCR法与WB法检测细胞周期调控蛋白cyclin D1、PCNA及周期抑制蛋白P21的表达水平。结果本研究通过qRCR验证发现，RA组LncRNA GAPLINC表达水平明显高于创伤组（P<0.05）；特异性siRNA对GAPLINC的干扰效率为（85.96±1.76）%（P <0.05）。敲低GAPLINC后，EdU细胞增殖实验显示，与空白对照组（6.02±0.48）%、溶剂对照组（6.32±1.48）%和阴性对照组（6.12±1.51）%相比，GAPLINC干扰组S期细胞占（2.89±1.53）%，较各对照组明显降低（P <0.05）。利用流式细胞术检测各组细胞周期分布，结果显示GAPLINC干扰组PI值，即S+G2/M期细胞所占的百分比为（14.92±5.34）%，明显低于空白对照组（29.68±8.48）%、溶剂对照组（28.97±6.82）%、阴性对照组（31.13±5.13）%（P<0.05）。敲低GAPLINC后，与增殖表型正相关的基因Cyclin D1和PCNA的mRNA和蛋白水平均下降 （P<0.05），而与增殖表型负相关的基因p21表达上调（P<0.05）。结论LncRNA GAPLINC在RA-FLS细胞中高表达，敲低GAPLINC表达后，能显著降低RA-FLS细胞增殖活性，抑制细胞周期转化，提示LncRNA GAPLINC可能影响RA-FLS细胞增殖表型，导致滑膜异常增生，参与RA疾病的进展。

Keywords

• 长链非编码RNA;类风湿关节炎;滑膜增生;成纤维样滑膜细胞;细胞增殖