Науковий вісник ветеринарної медицини (Dec 2022)
Оптимізація полімеразної ланцюгової реакції для моніторингу інфікованості іксодових кліщів Borrelia burgdorferi
Abstract
Визначення показників інфікованості іксодових кліщів збудниками кліщового бореліозу та встановлення належності до патогенного генотипу за допомогою методу ПЛР є важливою складовою для проведення моніторингу, оцінки ризиків та контролю епізоотичної ситуації щодо Лайм-бореліозу на різних територіях. Наведено результати апробації та оптимізації внутрішньолабораторного протоколу класичної полімеразної реакції для ідентифікації збудників хвороби Лайма. Методом класичної ПЛР дослідили вісім проб екстрагованого ДНК з іксодових кліщів, зібраних із рослинності в лісопарковому урочищі «Голендерня», м. Біла Церква Київська область. Проби були сформовані з пулів по десять екземплярів кліщів: сім пулів – кліщі роду I. ricinus та один пул – кліщі роду D. reticulatus. Використали набори праймерів для виявлення ДНК комплексу борелій Borrelia burgdorferi sensu lato; Borrelia burgdorferi та патогенних борелій: Borrelia burgdorferi sensu stricto Borrelia garinii та Borrelia afzelii. Було модифіковано протокол виділення нуклеїнових кислот з кліщів за допомогою комерційного набору Indi Spin Pathogen Kit. Оптимізацію температурних режимів ампліфікації провели методом градієнта температур відпалу для кожної пари праймерів. За результатами дослідження розроблено внутрішньолабораторні протоколи класичної ПЛР з використанням специфічних олігонуклеотидних праймерів. Встановили, що в кожному з пулів I. ricinus та D. reticulatus були наявні інфіковані екземпляри кліщів комплексом борелій Borrelia burgdorferi sensu lato та генотипом Borrelia afzelii, а також ідентифіковано генотип Borrelia burgdorferi sensu stricto в одному з пулів I. ricinus та D. reticulatus, ДНК генотип Borrelia garinii не виявлено. Розроблені внутрішньолабораторні протоколи класичної ПЛР в подальшому будуть використані для досліджень інфікованості іксодових кліщів збудниками кліщового бореліозу: Borrelia burgdorferi sensu lato, Borrelia burgdorferi sensu stricto та Borrelia afzelii.
Keywords
