شناسایی و خالص سازی دو نوروتوکسین موثر بر پستانداران از زهر عقرب ایرانی بوتتوس شاخ

Abstract

زهر عقرب شامل گروهی از پپتیدهای سمی می باشد که بر روی پستانداران، حشرات و سخت پوستان اثر می گذارند. پپتیدهای توکسیک فاکتورهای اصلی در سم عقرب هستند که باعث سمیت می شوند (توکسین ها در حدود یک الی سه درصد سم عقرب را تشکیل می دهند). اکثر توکسین های سمی از زهر عقرب های خانواده بوتیده جداسازی شده است. عقرب بوتتوس شاخ متعلق به خانواده عقربهای بوتیده می باشد که بیشتر در مناطق غربی ایران یافت می شود، که تا به حال بر روی زهر آن هیچ مطالعه‌ای انجام نگرفته است. بنابراین در این تحقیق، ما توکسین های موثر بر پستانداران را از زهر عقرب ایرانی بوتتوس شاخ جداسازی می کنیم. در ابتدا سم خام به مدت 48 ساعت در برابر آب دو بار تقطیر دیالیز و سپس سانتریفوژ می‌شود تا موکوپروتئین‌های نا محلول از قسمت محلول جداسازی شود؛ آنگاه قسمت محلول بر روی ستون ژل فیلتراسیون حاوی سفادکس G-50 برده شد. سمیت هر فراکسیون به وسیله تزریق داخل وریدی دم موش معین گردید. آنگاه برای خالص سازی بیشتر فراکسیون‌های توکسیک از دو مرحله کروماتوگرافی تعویض یونی (آنیونی) و HPLC فاز معکوس استفاده شد. خلوص فراکسیونهای توکسیک انتهایی حاوی پروتئین به وسیله HPLC فاز معکوس و SDS-PAGE بررسی شد که دو نوروتوکسین BS311 وBS313 خالص سازی شد. نتایج در این تحقیق نشان می‌دهد که LD50 سم خام بر روی موش mice/µg 84 می باشد و حاوی حداقل 20 پپتید از وزن مولکولی بالا تا پایین می باشد که فقط دو تا از آنها که بر روی موشها اثر توکسیک داشتند جداسازی شد. LD50 این توکسین ها به ترتیب 3 و 17/2 میکروگرم برای هر موش می باشد. وزن مولکولی توکسین های BS311و BS313 که به وسیله SDS-PAGE مشخص گردید به ترتیب 7860 و7600 دالتون می‌باشد. نتیجه این تحقیق نشان می‌دهد که فاکتورهای اصلی توکسیک در زهر عقرب بوتتوس شاخ دارای وزن مولکولی پایین می باشند.

Keywords

• عقرب
• زهر
• خالص سازی
• جداسازی
• توکسین
• بوتتوس شاخ