High quality DNA from human papillomavirus (HPV) for PCR/RFLPs

Abstract

The analysis of DNA in clinical samples for a secure diagnostic has become indispensable nowadays. Techniques approaching isolation of high molecular weigth DNA of HPV could lead to efficient amplification and early clinical diagnosis of the virus DNA by PCR (polymerase chain reaction). We describe a fast, non-toxical, efficient and cheap method for DNA isolation of human papilloma virus (HPV) from cervical smears using guanidine (DNAzol solution). A 450 bp DNA band correponding to the late region (L1) of the virus genome was detected by PCR, showing that the DNAzol extraction soluction generated a good viral DNA yield. The electrophoretic pattern after digestion with restriction endonucleases (RFLPs/PCR) revealed the predominance of HPV-16 and HPV-33 in the samples from the State of Alagoas, Brazil.A detecção de DNA em amostras clínicas visando um diagnóstico mais seguro vem se tornando uma prática comum em laboratórios de análise clínica. Metodologias que objetivem o isolamento de DNA de alto peso molecular de HPV podem levar a uma amplificação precisa e diagnose precoce do DNA do vírus por PCR (reação de polimerase em cadeia). Nós descrevemos um método para o isolamento do DNA do vírus do papiloma humano de amostras cervicais utilizando o detergente guanidina (solução DNAzol). O método foi rápido, não-tóxico e eficiente. Uma banda de DNA de 450 pb correspondente à região tardia (L1) do genoma viral foi detectada por PCR, mostrando que a extração com DNAzol gerou quantidade suficiente de DNA para análise. O padrão eletroforético, após digestão com endonucleases de restrição (RFLPs/PCR), revelou predominância de HPV 16 e HPV-33 nas amostras no Estado de Alagoas, Brasil.

Keywords

• Human papillomavirus
• DNA purification
• PCR
• RFLP