重构腺相关病毒转导 PDX- 1 对 C2C12 分化为胰岛素分泌细胞的作用

Abstract

【目的】重构含有 PDX- 1 的腺相关病毒载体 , 将 PDX- 1 转导入 C2C12 细胞 , 观察胰岛素分泌量的改变。【方法】应用 PCR 方法将 PDX- 1 从 pZL1 质粒中克隆出来, 安装到Stratagene 公司的腺相关病毒(AAV Helper- Free System)表达系统中 , 转染 HEK293 细胞 , 培养 72 h, 提取病毒悬液 , 转导 PDX- 1 进入 C2C12 细胞中, 检测细胞培养液中的胰岛素含量。【结果】①用 X- gal 染色系统检测, 可见有蓝色的阳性细胞。②病毒的粗略的浓度经计算后大约为 1012/mL, 转导的病毒数约为 1011。③PCR 结果: 用重构的腺相关病毒转导后 C2C12 有胰岛素及 PDX- 1 的 mRNA 的表达。④用重构的腺相关病毒转导 PDX- 1 进入 C2C12 后的培养液的胰岛素浓度为(5.5±1.1) μIU/mL, 较其他方法也有较明显的增加(P< 0.05)。【结论】通过应用含有 PDX- 1 基因的重构腺相关病毒载体可以转导 PDX- 1 在 C2C12 细胞中表达, 且可以提高 C2C12 分化为胰岛素分泌细胞的分泌量。