Agro@mbiente On-line (Aug 2011)
Isolamento, armazenamento e determinação da colonização por fungos “dark septate” a partir de plantas de arroz. = Isolation, storage and determination of fungal colonization “dark septate” from rice plants.
Abstract
Endophyte fungi known as DSEF can be plant-growth-promoting. Aiming to improve a methodology for the isolation, storage and determine the rice roots colonization by “dark septate”, a study was developed based on the achievement of these microorganisms in Oryza glumaepatula plants collected in Amazon region. The plant roots of twelve O. glumaepatula samples were sectioned, disinfected, and placed in plates with agar-malte medium added of chloramphenicol, sulphametazole and trimetropin. The isolates were evaluated in relation of dark septate characteristics and stored in distilled water, and in distilled water added of glycerol. Five isolates considered dark septate were re-inoculated in O. glumaepatula and O. sativa, and also analyzed through amplification and sequencing of ITS1-5.8S-ITS2 region. The agar-malte medium was efficient to isolate dark septate, and more than 50 isolates were obtained. The distilled water and also distilled water added of glycerol were efficient to maintain the fungus culture at least 12 months. The five isolates re-inoculated were able to colonize both O. glumaepatula and O. sativa, without pathogenic symptoms observed. The molecular approach reveled that these fungus are not similar to each other and also to others dark septate already described. These results show that the proposed methodology was efficient to obtain distinct fungus species and O. glumaepatula is a host to high diversity of this fungus group.=Os fungos endofíticos conhecidos como DSEF ou “dark septate” podem ser promotores de crescimento vegetal. Com o objetivo de aperfeiçoar uma metodologia para o isolamento, armazenamento e determinação da colonização de raízes de arroz por fungos “dark septate” desenvolveu-se um estudo a partir da obtenção destes microrganismos em plantas de Oryza glumaepatula coletadas em ambientes amazônicos. As raízes das plantas de doze amostras de O. glumaepatula foram seccionadas, desinfestadas e dispostas em placas com o meio ágarmalte adicionado de cloranfenicol, sulfametazol e trimetropina. Os isolados obtidos foram avaliados quanto às características de “dark septate” e armazenados em água destilada com e sem a adição de glicerol. Cinco isolados fúngicos considerados “dark septate” foram reinoculados em plantas de O. glumaepatula e em O. sativa e, também,caracterizados molecularmente através da amplificação e sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2. O meio de cultura ágar-malte foi eficiente para a obtenção de “dark septate”, obtendo-se mais de 50 isolados. O armazenamento em água destilada e em água destilada adicionada de glicerol mostrou-se eficiente para a manutenção das culturas fúngicas por pelo menos 12 meses. Os cinco isolados fúngicos reinoculados foram capazes de colonizar tanto raízes O. glumaepatula quanto O. sativa, não desencadeando sintomas de patogenicidade. A análise molecular mostrou que estes fungos apresentam baixa similaridade entre eles e não possuem similaridade com fungos “dark septate” já descritos, indicando que a metodologia empregada permitiu a obtenção de espécies fúngicas diversas e que a espécie O. glumaepatula abriga alta diversidade deste grupo de fungos.
