Anticorpos anti-HBs obtidos em coelhos e sua utilização como reagentes para testes sorológicos no diagnóstico da hepatite B Anti-HBs antibodies obtained in rabbits and its use as reagents for serological tests in the diagnosis of hepatitis B

Abstract

Pela técnica de cromatografia de afinidade, utilizando-se a resina de Sepharose 4B ligada ao anti-HBs, obteve-se na passagem de plasma de portador assintomático de antígeno HBs, um antígeno parcialmente purificado. Este antígeno foi utilizado para a inoculação em coelhos, num esquema de cinco doses, sendo a primeira dose de 1mg e as quatro subseqüentes de 0,5 mg, com intervalos aproximadamente de quinze dias. Observando-se que os títulos não mais variaram após a quinta inoculação, os animais foram sangrados no 62° dia e os anticorpos anti-HBs obtidos foram padronizados através dos seguintes métodos para detecção de antígeno HBs: a) Hemaglutinação passiva reversa (HAPR) – utilizando-se a gamaglobulina específica obtida de soro imune dos coelhos através de cromatografia de afinidade, alcançando uma concentração ótima de apenas 10µg/ml para a sensibilização de hemácias de carneiro a 5%, fixadas com glutaraldeído. B) Contraimunoeletroforese (CIEF) – utilizando-se o soro imune diluído até 1/20 como reagente para a detecção do antígeno HBs. O soro imune anti-HBs foi também utilizado para a conjugação com uma nova resina de Sepharose 4b tendo uma captação aproximada de 0,5 a 1,0mg antígeno HBs por ml de resina após completa saturação.By the method of affinity chromatography a partially purified antigen was obtained after passing the plasma of an asymptomatic carrier of HBs Ag through a column of Sepharose 4 B linked to angi-HBs. This antigen was inoculated in rabbits using a schedule of 1.0 mg in the first dose and 4 other doses of 0,5 mg with intervals of approximately 15 days. Observing that blood samples colletcted after the 5th inoculation showed no change in antibody levels, the animals were bled on the 62 th day and these immune ser were standardized with the following tests for the detection of HBsAg: a) reverse passive hemagglutination (R-PHA) – using specific gamma globulin that was obtained from rabbit sera by affinity chromatography and reaching an optimal concentration of 10µg/ml to sensitise SRBC at 5% fixed in glutaraldehyde. b) Counter immuno electrophoresis (CIEP) – using the rabbit immune sera diluted to 1/20 as a reagent for the detection of HBsAg. The immune sera was also used to conjugate new Sepharose 4B for affinity chromatography and was found having a linking capacity of approximately 0,5 to 1,0mg of HbsAg per ml of Sepharose after complete saturation.