کلونینگ و تعیین توالی ژن کد کننده آنتی ژن اصلی سطحی (SAG1) توکسوپلاسما گونده ای

Abstract

در سالهای اخیر روشهای دسته بندی ژنتیکی سویه های توکسوپلاسما گونده ای بطور گسترده ای انجام شده است. از نقطه نظر تکنیکی, روشهای کاربردی زیادی برای مطالعه ژنتیکی روی لوکوسهای تک- کپی (Single-copy) همچونRFLP, PCR-RFLP, تعیین توالی (Sequencing), RAPD-PCR و آنالیز ایزوآنزیمی بکار گرفته شده است. ما در این تحقیق کلونینگ و تعیین توالی ژن کد کننده آنتی ژن اصلی سطحی (P30 یاSAG1) توکسوپلاسما گونده ای را بررسی نمودیم. SAG1آنتی ژن ایمنودومینانت تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گونده ای است و به عنوان اصلی ترین مولکول در تهیه واکسن های نوترکیب و واکسن های DNA علیه بیماری توکسوپلاسموزیس می‌باشد. در این تحقیق, ابتدا DNA ژنومی توکسوپلاسما گونده ای استخراج گردید و به عنوان الگو برای PCR ژن SAG1 استفاده شد. سپس محصول PCR درون پلاسمید pTZ57R/T کلون شد و پلاسمید نوترکیب حاوی ژن (pT-SAG1) SAG1 از باکتریهای ترانسفورم شده استخراج و ژن SAG1 کلون شده در پلاسمید PT-SAG1 تعیین توالی شد. نتایج نشان داد که ژن P30 اینترون ندارد و می‌تواند از DNA ژنومی مرحله تاکی زوئیت جدا شود. همچنین نتایج نشان داد که ژن SAG1 در پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است و پلاسمید نوترکیب تولید شده است و باکتری E.coli سویهTG1 بهترین میزبان برای ترانسفورماسیون پلاسمید pT-SAG1 جدا شده از سویه با حدت توکسوپلاسما گونده ای(معروف بهRH), شباهت صد در صدی با سویه P-Br, سویهP و سویه C دارد و با سویه RH و سویه ZS1 شباهت 98 درصدی دارد.

Keywords

• کلونینگ
• تعیین توالی
• توکسوپلاسما گونده ای
• SAG1
• P30