Prueba de microneutralización para detección la de anticuerpos contra el virus dengue serotipo 2

Abstract

Objetivo: Estandarizar la prueba de microneutralización (MNT) para detección de anticuerpos neutralizantes contra el virus dengue serotipo 2 (DENV-2) en la línea celular Vero-76. Materiales y métodos: Se evaluaron diferentes concentraciones celulares (0,6 x105 cel/mL, 0,9 x105 cel/mL, 1,2 x105 cel/mL), porcentajes de 2%, 3% y 4% de suero bovino fetal (SBF), número de pasajes del stock de virus y los días de incubación. La semilla viral se confirmó por RT-qPCR. El DENV-2 se propagó realizando 5 pasajes en células Vero-76, seguidamente se tituló el virus en placas de 96 pozos y se evaluaron 2 métodos de infección celular: monocapa y células en suspensión, además se determinó el día óptimo de coloración de las células. Obtenidos los resultados, se procesaron mediante MNT para DENV-2 las siguientes muestras: 5 sueros negativos a DENV-2 y YFV, 5 sueros negativos a DENV-2 y positivos a YFV y 5 sueros positivos a DENV-2 seleccionados mediante la prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) Resultados: El método óptimo para MNT utilizó células en suspensión (0,9 x 105 cel/mL), 2% de SBF y semilla viral pasaje 5. La mínima dilución capaz de diferenciar una muestra positiva a DENV-2 fue 1:40 y el tiempo de incubación para la MNT para DENV-2 fue de 10 días. Conclusión: La MNT permite detectar anticuerpos neutralizantes IgG contra DENV-2, brinda resultados fiables y se puede analizar un mayor número de muestras con ahorro de materiales.

Keywords

• Dengue
• Serotipo
• Neutralización
• Optimización
• Inmunoglobulina