半边旗二萜类化合物5F对人翼状胬肉成纤维细胞结缔组织生长因子表达和胶原合成的影响

Abstract

[目的]观察半边旗二萜类化合物5F（5F）对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增殖和胶原合成及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.[方法]利用手术切除的人翼状胬肉组织进行原代细胞培养,即得到HPF.将不同质量不同浓度（0、8、32、128）μg/mL的5F作用于HPF 24 h,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测5F对细胞增殖的作用;用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blot）检测5F对细胞中CTGFmRNA及蛋白表达水平的影响;用化学比色法检测5F对细胞胶原蛋白含量的影响.[结果]在HPF中加入不同质量浓度（0、8、32、128）μg/mL的5F作用24 h,各组剂量的5F均可以明显抑制HPF的增殖（P＜0.01）,其半数抑制率（IC50）为32.12μg/mL.在8～128μg/mL的剂量范围内,5F能显著地下调CTGF mRNA（0.69±0.05,0.38±0.06,0.19±0.04,与对照组0.82±0.09比较,P＜0.05或P＜0.01）和CTGF蛋白（82.34±5.16,31.46±4.98,23.28±2.65,与对照组98.12±7.20比较,P＜0.05或P＜0.01）的表达水平,能显著地降低胶原蛋白的含量（13.95±1.49,12.53±0.51,5.89±0.80,与对照组16.19±1.02比较,P＜0.05或P＜0.01）,且均有明显的剂量-效应关系.[结论]半边旗二萜类化合物5F能显著地抑制体外培养的HPF的增殖和胶原蛋白的含量,使细胞的CTGF mRNA及蛋白表达明显下调,并且呈显著的量效关系,表明半边旗5F具有体外抗纤维化作用,这为寻找有效治疗HPF的药物提供了新的思路.

Keywords

• 半边旗;二萜类;翼状胬肉;成纤维细胞;结缔组织生长因子;胶原