Evaluation of the allergenicity of spore and mycelia extracts of Pisolithus tinctorius

Abstract

The antigenic and allergenic chemical analysis of spore and mycelia extracts of Pisolithus tinctorius was carried out. The spores were collected from basidiocarps in plantations of Eucalyptus spp and the mycelia from culture in MNM medium. With basis on the fungus growth curve, the mycelia masses were obtained after 10, 20, 30, and 40 days of incubation, which correspond, respectively, to the beginning, middle and end of the log phase, and beginning of the decline phase. The mycelia masses, together with the spores, were submitted to the action of three extractors (Coca, Tris-HCl, and ammonium bicarbonate). The contents of carbohydrates and proteins were determined. The SDS-PAGE electrophoretical analysis revealed separate fractions in these extracts, besides common fractions, in function of cultivation time and extraction methods. The selected extracts for the allergic tests were the ones with the highest number of fractions. The prick-tests were conducted in 374 patients – rural workers, eucalyptus plantation works and college students. The positivity to the "prick test" with the antigenic extract of P. tinctorius was, respectively, 3.78%, 28.20% and 6.40%. Most prick-test positive patients (82.75%) also presented symptoms of respiratory allergy (asthma and rhinitis). There was no reactivity difference when the spore and mycelia extracts were employed. The analysis of the positive patients’ sera revealed the presence of IgE specific to the P. tinctorius antigens. Since Pisolithus tinctorius is found as mycorrhyza of Eucalyptus spp, and this plant is used in reforestation in most countries, the importance of that fungus should be regarded as a possible cause of respiratory allergies, especially in occupationally exposed workersFoi realizada a análise bioquímica, antigênica e alergênica de extratos de esporos e micélios de Pisolithus tinctorius. Os esporos foram coletados de basidiocarpos em plantações de Eucaliptus spp e os micélios obtidos de cultura em meio de MNM. Baseado na curva de crescimento do fungo, obteve-se massa miceliana aos 10, 20, 30 e 40 dias de incubação, que correspondem respectivamente ao início, meio, final da fase log e início da fase de declínio. A massa miceliana, juntamente com os esporos, foram submetidos a ação de três líquidos extratores (Coca, Tris-HCl e bicarbonato de amônio). Determinou-se os teores de carboidratos e proteínas. A análise eletroforética por SDS-PAGE revelou, além de frações comuns, frações distintas nestes extratos, em função do tempo de cultivo e métodos de extração. Os extratos selecionados para os testes alérgicos foram aqueles com maior número de frações. Realizou-se o "prick-test" em trabalhadores rurais, trabalhadores de áreas de plantações de Eucaliptus spp e em estudantes universitários, totalizando 374 pacientes. A positividade ao "prick-test" com extrato antigênico de P. tinctorius foi, respectivamente, 3,78%, 28,20% e 6,40%. A maioria dos pacientes positivos ao "prick-test" (82,75%) apresentava também sintomas de alergia respiratória (asma e/ou rinite). Não houve diferença de reatividade quando do emprego de extratos de esporos e de micélio do fungo. A análise dos soros dos pacientes positivos, revelou a presença de IgE específica aos antígenos do P. tinctorius. Considerando que o Pisolithus tinctorius é encontrado como micorriza de Eucaliptus spp e que o reflorestamento, na maioria dos países, é feito com esta planta, deve ser relevada a importância deste fungo como possível causador de alergias respiratórias, principalmente em trabalhadores ocupacionalmente expostos

Keywords

• Pisolithus tinctorius
• Basidiomycetes
• Mold allergens