Especiación de Selenio en muestras de sangre y plasma en pacientes con leucemia por HPLC-ICP-MS

Abstract

En el presente trabajo se desarrolló un método de análisis para la determinación de la concentración total de selenio en muestras de sangre completa y plasma de pacientes con leucemia mediante ICP-MS. Por otro lado, se desarrolló un método para la determinación de algunas especies de Se en muestras de sangre y plasma mediante HPLC-ICP-MS. Se emplearon diferentes fases móviles en modo isocrático. La separación más adecuada para las especies selenio DL cisteína y selenio DL metionina se obtuvieron con una fase móvil de: 0,1% 2-mercaptoetanol, 3% metanol, 0,06M acetato de amonio y 2mM de EDTA, a una velocidad de flujo de 1mL.min-1. Para selenio total, los límites de detección y cuantificación fueron 0,03 µg.L-1 y 0,04 µg.L-1 respectivamente. Las desviaciones estándar relativas (DER) en la corrida y entre corridas fueron de 0,8 % 2,71 % respectivamente, indicando una adecuada precisión en el análisis, adicionalmente con los valores obtenidos en la recuperación (101,15% ± 1,4) cuya exactitud es aceptable. Las concentraciones medias de selenio en sangre completa y plasma fueron de 243,6 ± 112,3 y 141,7 ± 34,1 µg.L-1 respectivamente para pacientes con leucemia y para la población control fueron de 198,0 ± 40,6 y 159,1 ± 30,1 µg.L-1 respectivamente Los límites de detección y de cuantificación obtenidos para las especies fueron: 0,46 y 0,47 µg.L-1 para la selenoDLcisteína y de 0,45 y 0,47 µg.L-1 para la selenoDLmetionina respectivamente. La precisión como (DER) fue menor al 5% se encontraron valores adecuados en el proceso de extracción con recuperaciones entre 95 y 105%. Se encontraron concentraciones de selenoDLcisteína en sangre y plasma de pacientes con leucemia de 171,25 ± 56,5 y 106,74 ± 11,1 µg.L-1 respectivamente y para la población control de 123,77 ± 16,2 y 84,96 ± 6,9 µg.L-1. Palabras clave: Selenio, sangre, plasma, leucemia, selenoproteínas, selenoaminoácidos, selenoDLcisteína, selenoDLmetionina. ABSTRACT The concentration of selenium in blood and plasma is the most appropriate magnitude for the valuation of the corporal content of selenium by means of analytic techniques for sin the for clinical practice. In this research, an analysis method to determine the total concentration of selenium in whole blood and plasma samples from patients with leukemia using ICP-MS was carried out. The limits of detection and quantification were 0.03 µg.L-1 and 0.04 µg.L-1 respectively. The relative standard deviations in and between runs were 0.8 % 2.71 % respectively, indicating an appropriate accuracy in the analysis and also with the values obtained in the recovery (101.15 % ± 1.4) whose accuracy is acceptable. The mean concentrations of selenium whole blood and plasma were 243.6 ± 112.3 and 141.7 ± 34.1 µg.L-1 respectively for patients with leukemia and for the control population were 198.0 ± 40.6 and 159.1 ± 30.1 µg.L-1 respectively. Furthermore, it was developed a method for the determination of some species in the same samples, through HPLC-ICP-MS using different mobile phases with isocratic mode. The most appropriate separation was obtained with a mobile phase of: 0.1 % 2- mercaptoethanol, 3 % methanol, 0,06M ammonium acetate and 2mM of EDTA, with pump speed of 1mL.min-1. The detection and quantification obtained were: 0.46 and 0.47 µg.L-1 for the seleno-DL-cysteine and 0.45 and 0.47 µg.L-1 for the seleno-DL-methionine respectively. The accuracy was 5% or even smaller than that. In the extraction process, recoveries between 95 and 105% were found. There were concentrations of seleno-DL-cysteine in whole blood and plasma from leukemia patients of 171.25 ± 56.5 and 106.74 ± 11.1 µg.L-1 respectively and for the control population of 123.77 ± 16.2 and 84.96 ± 6.9 µg.L-1. Key words: Selenium, blood, plasma, leukemia, selenoproteins, selenoaminoacids, selenoDLcysteine, selenoDLmetionine.