Acta Scientiarum: Animal Sciences (Oct 2008)
Método não-invasivo na obtenção de DNA de búfalos = Non-invasive method for buffalo DNA extraction
Abstract
O objetivo do trabalho foi comparar dois diferentes protocolos de extração de DNA de pelos de búfalos (Bubalus bubalis) e comparar três regiões de coleta de material (nuca, paleta direita e testa). Foram utilizados quatro búfalos com três repetições por animal e por região. No protocolo 1, foi utilizada a técnica do fenol-clorofórmio e no protocolo 2, a técnica de extração com CTAB. O protocolo 2 apresentou maior média de concentração de DNA para as amostras de pelos. Em relação ao local de retirada dos pelos, não foramencontradas diferenças significativas, porém nota-se que a região da testa dos animais apresentou maior concentração de DNA quando extraído com CTAB. Com relação à praticidade de utilização dos dois métodos avaliados, o protocolo 2, além de ter apresentadomaior concentração de DNA, apresentou menor tempo de execução, 3h 50 min., além de evitar a utilização de mais um reagente tóxico, como é o caso do fenol. Por esse motivo, sugere-se que a coleta seja efetuada na região da testa, levando-se em consideração apraticidade e a acessibilidade aos pelos e sugere-se também a aplicação do protocolo de extração de DNA com CTAB, pela praticidade e pelo menor tempo de execução.The objective of this paper was to compare two different protocols for DNA extraction from buffalo (Bubalus bubalis) fur. Also, three sites for the fur source (back of the head, right shoulder andforehead) were compared. For the experiments, four animals were used and three replicates for each site on each animal were performed. For protocol 1, the phenol chloroform technique was used, and the CTAB extraction technique was used for protocol 2. Protocol 2 resulted in a higher average of DNA concentration for the fur samples. Considering the body region from where the fur was extracted, there were no significant differences in DNA concentration. However, the forehead showed a higher concentration when extractedwith CTAB. Considering the ease of use for each protocol, protocol 2, in addition to presenting greater concentrations of DNA, took less time to be performed — three hours and fifty minutes, and did not require another toxic reagent, such as phenol. For thisreason, it is recommended that the material be extracted from the forehead, asit is an easy site to access the fur. The recommended protocol for DNA extraction is with CTAB, because of its practicality and lower execution time.
