重组蛋白PTD-HSP27进入细胞保护视网膜神经节细胞抗氧化损伤

Abstract

【目的】观察重组蛋白PTD-HSP27穿透视网膜视神经节细胞RGC-5的能力及其效率，测定重组蛋白PTD-HSP27对氯化钴（CoCl2）诱导的视网膜神经节细胞（RGC-5）细胞损伤的保护作用并初步探讨其机制。【方法】用FITC标记重组蛋白PTD-HSP27，荧光显微镜观察PTD-HSP27-FITC的穿透细胞膜的能力，用紫外分光光度计检测PTD-HSP27-FITC的穿膜效率，随后建立RGC-5细胞损伤模型。实验分为正常对照组、CoCl2损伤组、PTD-HSP27+CoCl2处理组，分别进行相应处理后，通过Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡比例；Western Blotting检测各组细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达水平。【结果】荧光显微镜下观察到重组蛋白PTD-HSP27-FITC能够有效通过细胞膜进入RGC-5细胞内，其进入细胞的效率为（47.29±2.33）%。CoCl2浓度依赖性地抑制RGC-5细胞存活率。比较正常对照组、CoCl2损伤组和PTD-HSP27+CoCl2处理组的检测结果示：PTD-HSP27能有效抑制CoCl2诱导的RGC-5细胞早期凋亡（P<0.01）；PTD-HSP27能有效提高Bcl-2/Bax的表达比例，并抑制Caspase-3的激活（P<0.01）。【结论】重组蛋白PTD-HSP27能有效地穿过细胞膜进入RGC-5细胞内，且对CoCl2诱导的RGC-5细胞氧化应激损伤有保护作用，机制可能是通过调控Bcl-2/Bax的蛋白比例抑制细胞的早期凋亡。

Keywords

• 视网膜神经节细胞;氧化损伤;热休克蛋白27;蛋白转导域;细胞凋亡